APOE基因多态性对神经元轴突生长的影响
本文关键词：APOE基因多态性对神经元轴突生长的影响
更多相关文章： 细胞分裂周期蛋白 神经元 微管蛋白 轴突 载脂蛋白E 树突 微丝
【摘要】：目的：观察不同的APOE基因型所翻译出的不同亚型的ApoE蛋白（apolipoprotein E，ApoE）对原代培养的神经元树突及轴突生长的影响，并探讨其可能机制。 方法：将新生1天内的APOE基因敲除乳鼠和C57系野生乳鼠消毒断头，并小心剥离脑膜和可见血管，，然后取出大脑皮层，剪碎后进行神经元原代培养；取APOE基因敲除鼠神经元4组，分别在培养基中加入重组人类ApoE2、ApoE3、ApoE4蛋白，依次分为ApoE2组、ApoE3组、ApoE4组，另外未加入任何蛋白的APOE基因敲除鼠神经元定为ApoE( )组，培养的野生鼠神经元则定为野生组；定期在倒置相差显微镜下观察神经元生长情况，并照片记录，测量各组神经元平均突起数量和各组神经元轴突平均长度；通过荧光免疫实验对神经元轴突进行染色，并照片记录，通过软件对各组神经元轴突荧光强度进行分析；通过Western blot实验检测各组神经元中cdc42（细胞分裂周期蛋白，cell division cycle42，cdc42）的表达。 结果：培养第1、3、5天各组神经元平均轴突长度不相同，在第5d，野生鼠和ApoE基因敲除鼠神经元平均轴突长度分别为（248.98±10.57μm）和（226.44±8.32μm）（p㩳0.05）；加入重组人类ApoE2、3、4组轴突长度分别为（248.98±10.57μm），（243.91±8.37μm），（225.23±7.33μm），其中ApoE（-）和ApoE4组轴突长度短于ApoE2、3组、野生组轴突长度(P㩳0.05)；第5天，加入ApoE2、3、4组神经元轴突荧光强度分别为(52.40±6.33)、(50.50±8.21)、(39.00±8.32)，其中加入重组人类ApoE4组的轴突荧光强度低于加入ApoE2、3组的荧光强度(P㩳0.05)；野生组cdc42蛋白表达高于ApoE基因敲除组，野生组、ApoE2组、ApoE3组间无明显差异，ApoE( )组、ApoE4组间亦无明显差异。 结论：不同亚型ApoE蛋白对神经元突起生长以及对tubulin Ⅲ及cdc42表达的影响不同，ApoE2、ApoE3对突起生长的促进作用以及对tubulin Ⅲ及cdc42的表达的促进作用明显强于ApoE4，这可能是ApoE影响神经元突起生长的可能机制之一。
【关键词】：细胞分裂周期蛋白 神经元 微管蛋白 轴突 载脂蛋白E 树突 微丝
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：
- 英汉缩写对照5-7
- 摘要7-9
- ABSTRACT9-11
- 前言11-12
- 1.材料与方法12-21
- 1.1 仪器和试剂12-14
- 1.2 实验方法14-20
- 1.3 统计学处理20-21
- 2.结果21-28
- 2.1 神经元观察及鉴定21-22
- 2.2 轴突平均长度和树突个数22-25
- 2.3 神经元轴突免疫荧光强度25-27
- 2.4 各组神经元 cdc42 蛋白表达27-28
- 3.讨论28-32
- 全文总结32-33
- 参考文献33-36
- 文献综述36-45
- 参考文献40-45
- 致谢45-46
- 攻读硕士期间发表文章46-47
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