氧化异阿朴菲—硫辛酸双分子杂合体抗AD作用及机制研究

发布时间：2017-10-29 07:05

  本文关键词：氧化异阿朴菲—硫辛酸双分子杂合体抗AD作用及机制研究

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【摘要】：随着人类平均寿命的逐年增加，全世界范围内的阿尔茨海默病发病率显著升高，已严重威胁老年人的身体健康。阿尔茨海默病普遍认同的发病机制包括胆碱能假说、β-淀粉样蛋白级联假说和氧化应激假说。而目前认为抗胆碱酯酶抑制剂是最有效治疗药物，其主要作用靶点为乙酰胆碱酯酶的活性位点。近年来，随着乙酰胆碱酯酶外周阴离子位点的发现及其促进淀粉样蛋白沉积作用被揭示，寻找或合成针对乙酰胆碱酯酶双位点抑制剂以及偶联抗氧化基团的多位点抑制剂成为抗阿尔茨海默病药物研究热点。 本课题组前期体外试验证实蝙蝠葛提取物氧化异阿朴菲类生物碱及其化学修饰衍生物具有良好的抗阿尔茨海默病作用，主要作用位点为乙酰胆碱酯酶外周阴离子位点，本研究利用化学合成氧化异阿朴菲-9-位修饰物与硫辛酸双分子杂合体，，通过体外、体内试验，探究氧化异阿朴菲-硫辛酸双杂合体分子的抗AD活性及其作用机制,为后期的新药开发提供初步试验依据。 目的：探究氧化异阿朴菲-硫辛酸双杂合体分子的抗AD活性及其作用机制,为后期的新药开发提供初步试验依据。方法：（1）体外试验：a.购买商品化的AChE、BuChE,利用改良Ellman法检测氧化异阿朴菲-硫辛酸双杂合体分子抗胆碱酯酶活性；b.利用培养的细胞，MTT法检测氧化异阿扑菲-硫辛酸双分子杂合体细胞毒性及对H2O2损伤的保护作用。（2）体内实验：建立Aβ42转基因果蝇模型，设立对照组、溶剂对照组、模型组、不同浓度梯度的给药组，观察以下指标：（1）果蝇生存率、攀爬能力；（2）检测果蝇脑组织SOD、MDA水平，衡量果蝇脑组织氧化应激水平；（3）检测果蝇脑组织ATP含量，衡量果蝇脑组织线粒体损伤水平；（4）果蝇脑组织切片HE染色，比较病理损伤程度。收集数据，作统计学分析。结果与结论：本研究发现化合物8-11，细胞毒性低，体外都具有不同程度地抗AChE活性，其中以化合物8、9为甚。化合物8-11作用于Aβ42转基因果蝇，显著降低果蝇脑组织氧化应激水平，减轻线粒体损伤，抑制脑组织胆碱酯酶活性，脑组织病理损伤不同程度地改善。
【关键词】：阿尔茨海默病 氧化异阿朴菲-硫辛酸双分子杂合体 胆碱酯酶抑制剂 氧化应激 线粒体损伤
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英汉缩略词对照表10-11
• 前言11-16
• 1 材料与方法16-32
• 1.1 实验材料16-19
• 1.1.1 实验动物16-17
• 1.1.2 果蝇普通玉米培养基的配制17-18
• 1.1.3 果蝇的培养18
• 1.1.4 果蝇的麻醉18
• 1.1.5 处女蝇的收集18
• 1.1.6 果蝇杂交18-19
• 1.2 实验试剂19-21
• 1.3 实验仪器21-23
• 1.4 实验方法23-29
• 1.4.1 氧化异阿扑菲-硫辛酸双杂合体合成路线23-24
• 1.4.2 AChE 和 BChE 活性检测24-25
• 1.4.3 SH-SY5Y 细胞培养 ,MTT法检测细胞活性25
• 1.4.4 验证模型是否成功25-29
• 1.5 研究氧化异阿扑菲-硫辛酸双分子杂合体对 Elav-GAL4/UAS 系统 Aβ42 转基因果蝇模型神经变性是否具有作用29
• 1.5.1 果蝇生存实验29
• 1.5.2 果蝇爬行能力29
• 1.6 氧化异阿扑菲-硫辛酸双分子杂合体对 Aβ42 转基因果蝇模型的作用机制29-31
• 1.6.1 果蝇脑组织 SOD 活性和 MDA 含量测定29
• 1.6.2 果蝇脑组织 ATP 含量测定29-30
• 1.6.3 果蝇脑组织 CHE 含量测定30
• 1.6.4 果蝇脑部组织病理切片 HE 染色观察30-31
• 1.7 统计方法31-32
• 2 结果32-42
• 2.1 体外实验32-34
• 2.1.1 氧化异阿扑菲-硫辛酸双分子杂合体抑制 AChE 和 BuChE 的活性32-33
• 2.1.2 氧化异阿扑菲-硫辛酸双分子杂合体细胞毒性及对 H2O2损伤的SH-SY5Y 细胞的保护作用33-34
• 2.2 Elav-GAL4/UAS 系统 Aβ42 转基因果蝇34-42
• 2.2.1 模型组 Aβ42 mRNA 表达34-35
• 2.2.2 氧化异阿扑菲-硫辛酸双分子杂合体对 Aβ42 转基因果蝇爬行能力的影响35-37
• 2.2.3 氧化异阿扑菲-硫辛酸双分子杂合体对 Aβ42 转基因果蝇寿命的影响37-38
• 2.2.4 氧化异阿扑菲-硫辛酸双分子杂合体对 Aβ42 转基因果蝇脑组织 SOD和 MDA 活性的影响38-39
• 2.2.5 氧化异阿扑菲-硫辛酸双分子杂合体对 Aβ42 转基因果蝇脑组织 ATP含量及 AChE 活性的影响39-41
• 2.2.6 果蝇脑部病理切片染色结果41-42
• 3 讨论42-45
• 3.1 药物浓度与治疗效应42
• 3.2 双点位学说42-43
• 3.3 自由基与氧化应激43-44
• 3.4 线粒体损伤44-45
• 4 结论45-46
• 参考文献46-49
• 综述49-62
• 攻读学位期间发表的学术论文目录62-63
• 致谢63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 ;Synthesis of Alkylene-linked Dimers of (-)-Huperzine A[J];Chinese Chemical Letters;2002年01期

2 吴婷;丁新生;董海蓉;王蔚;;MK-801对转Aβ42基因果蝇阿尔茨海默病模型的神经保护作用[J];南京医科大学学报(自然科学版);2008年12期

3 陈蕾;房雷;房旭彬;苟少华;;新型多靶向乙酰胆碱酯酶抑制剂抗阿尔茨海默病研究进展[J];中国药学杂志;2010年21期

4 杨文超;孙琦;喻宁熙;朱晓磊;杨光富;;治疗阿尔茨海默病的乙酰胆碱酯酶抑制剂的分子设计:从多位点抑制剂到一药多靶[J];药学学报;2012年03期

本文编号：1111887