aFGF和TAT-aFGF对ADDLs损伤的大鼠原代皮质神经元突起的保护作用研究

发布时间：2017-11-17 04:00

  本文关键词：aFGF和TAT-aFGF对ADDLs损伤的大鼠原代皮质神经元突起的保护作用研究

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【摘要】：目的:利用β淀粉样蛋白(amyloid beta,Aβ)寡聚体(Aβ-derived diffusible ligands,ADDLs)处理培养6天(DIV6)的SD乳鼠皮质神经元,建立阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)体外模型,观察酸性成纤维细胞生长因子(a FGF)及其改构体(TAT-a FGF)对皮质神经元突起的保护作用,并探索其相关神经保护作用的机制。方法:(1)制备和鉴定ADDLs。用不同浓度的ADDLs(125、250、500、1000 n M)处理DIV6原代新生大鼠皮质神经细胞,MTT检测细胞活力,免疫荧光检测各组MAP2阳性神经元的形态,确定最佳造模剂量,建立AD体外细胞模型。(2)不同浓度的a FGF预保护原代皮质神经元2 hrs,用最佳造模浓度250 n M的ADDLs与相应浓度a FGF或TAT-a FGF共同处理细胞24 hrs,MTT法检测细胞活力,免疫荧光检测各组MAP2阳性神经元的形态,确定a FGF和TAT-a FGF最佳作用浓度。(3)选用最佳作用浓度的aFGF或TAT-aFGF作用ADDLs损伤的原代神经元,免疫印记检测CREB磷酸化水平、PI3K/AKT及MEK/ERK信号通路以及突触相关蛋白(MAP2、PSD95)的表达情况,同时采用PI3K抑制剂LY294002或ERK1/2抑制剂PD98059分组进行干预实验,检测各组细胞存活率、信号通路分子以及突触相关蛋白的改变情况。结果:MTT与免疫荧光实验证明ADDLs最佳造模浓度为250 n M,细胞活力为66.3%;建立了ADDLs诱导皮质神经损伤模型,筛选并确定a FGF和TAT-a FGF最佳作用浓度均为1000 ng/m L,在该浓度下a FGF或TAT-a FGF均能很好地拮抗ADDLs对皮质神经元造成的损伤,发挥神经保护效应;通路蛋白和突触相关蛋白检测发现:(1)在PI3K/AKT通路中,a FGF或TAT-a FGF作用24hrs后PI3K、AKT、GSK3β的磷酸化水平以及MAP2与PSD95的表达水平显著上调,加入PI3K抑制剂LY294002后其上调作用得到明显抑制,同时细胞存活率也分别降至62.0%和61.8%。(2)在MEK/ERK通路中,a FGF或TAT-a FGF作用24hrs后ERK、CREB的磷酸化水平及MAP2和PSD95的蛋白表达水平也显著上调。加入ERK1/2抑制剂PD98059后,其上调作用得到明显抑制,同时细胞活率分别降至61.4%和62.8%。结论:a FGF和TAT-a FGF通过PI3K/AKT/GSK3β和ERK上调CREB磷酸化水平,促进突触相关蛋白MAP2与PSD95表达,拮抗ADDLs诱导皮质神经元突起损伤,发挥其神经保护效应。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.16

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1 何向;aFGF和TAT-aFGF对ADDLs损伤的大鼠原代皮质神经元突起的保护作用研究[D];暨南大学;2016年

2 林健聪;Tat-aFGF融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及对海马神经元的保护作用[D];暨南大学;2010年

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本文编号：1194693