抗Aβ42单链抗体的性质与功能分析

发布时间：2017-11-21 15:00

  本文关键词：抗Aβ42单链抗体的性质与功能分析

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【摘要】：阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是最常见的神经退行性疾病，平均在8.5个人中就会有一个人被诊断患有老年痴呆疾病。AD的主要病理学变化表现为细胞外β-淀粉样蛋白（amyloid-beta, Aβ)沉积形成淀粉样斑块（senile plaques, SP）和细胞内形成的神经纤维缠结（neurofibrillary tangles, NFT），包括脑内Tau蛋白的过度磷酸化。 AD病因及发病机制迄今尚不明确,淀粉样蛋白级联假说是过去25年中对于AD的分子理疗模型中最有影响力的假说。该假说认为APP降解产生过多的Aβ42是AD发病机制中的起始事件，接着引起一系列病理学变化，进而导致痴呆的发生，所以Aβ42异常分泌和产生过多是AD发病的核心环节。 现有的对于AD的被动免疫治疗中多采用人源化的多克隆抗体或单克隆抗体，但是由于其分子大不易穿过血脑屏障不能快速有效清除脑内的Aβ42，并且还会引起免疫应答的副作用而被限制用于临床上。因此，构建小分子且无免疫原性的抗体片段成为研究的热点。 本课题组的张媛博士从构建的抗体库中筛选得到能够特异性识别Aβ42寡聚体的单链抗体菌株，该菌株经过测序与Genbank比对表明其具有典型的抗体可变区。本研究对此单链抗体菌株进行诱导，表达出该单链抗体蛋白。然后利用分子生物学和细胞生物学等方法对其性质和功能进行分析。首先通过Dot blot和Western blot方法证明了单链抗体能够特异性识别Aβ42寡聚体。然后我们用间接ELISA方法测定单链抗体对Aβ42寡聚体的结合力。结果显示两种单链抗体都可以在nM级别水平发挥作用。进一步用ELISA方法检测了单链抗体的亲和力，结果表明其对Aβ42寡聚体有较强的亲和力。ThT-F方法检测结果表明单链抗体能够抑制Aβ42的聚集以及诱导Aβ42聚集体的解聚。最后我们用MTT方法在细胞学水平检测了单链抗体对于Aβ42引起的细胞毒性作用，，结果表明单链抗体可以提高细胞的存活率，并且其对于毒性的抑制作用呈现浓度的依赖性。 上述结果为设计和研制免疫预防与治疗AD的新型小分子抗体药物提供了依据并奠定了基础，作为临床诊断和AD治疗的免疫制剂具有广阔的应用前景。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.16

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本文编号：1211293