远志提取物清除β淀粉样蛋白的途径及其信号通路的研究

发布时间：2017-12-16 02:10

本文关键词：远志提取物清除β淀粉样蛋白的途径及其信号通路的研究

【摘要】：背景：目前在对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发病机制研究中，β淀粉样蛋白（β-amyloid protein，Aβ）假说占据了重要地位。Aβ作为AD发病的起始因子，可导致淀粉样斑块（senile plaques,SP）的形成、Tau蛋白高度磷酸化、神经纤维的缠结(neuron fiber tangles，NFT)、神经元炎症、神经元功能丧失及死亡、痴呆等一系列病理变化。许多研发中的抗AD药物都是将Aβ作为靶点，以减少其生成或促进清除来延缓病程的发展。细胞自噬作为机体清除自身异常物质的主要途径，引起了研究者的广泛关注，增加自噬作用可以促进细胞清除过多的Aβ，这或许成为治疗AD的一个重要策略。目的：本研究从体外水平考察远志提取物（Polygala Tenuifolia Extract，PTE）对稳转APP/BACE1的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞株分泌Aβ的影响，并进一步探讨细胞自噬在引起这一变化中的作用及信号通路改变。方法：将复苏的细胞培养于100mm培养皿内，次日换液，待生长密度达80%-90%时传代。从第三代开始，在细胞在生长对数期时种板，贴壁后用不同浓度（0、5、10、20、40、100μg/ml）的PTE处理24h，0μg/ml作为对照组，并进行以下检测研究：（1）MTT法检测PTE对神经细胞株活力的影响。另外，在外源性Aβ的毒性作用下，考察PTE对神经细胞的保护作用；（2）ELISA检测CHO-APP/BACE1细胞分泌Aβ水平的变化；（3）荧光显微镜观察MDC染色后神经细胞内自噬小泡的变化；（4）Western blot考察自噬标志蛋白LC3的表达情况；（5）Western blot检测与自噬通路密切相关的激酶mTOR、p70s6k、Akt、AMPK、Raptor及其磷酸化蛋白的表达情况。结果：（1）MTT结果显示各浓度PTE处理组与对照组间细胞活力差异无统计学差异（P0.05）；（2）Aβ处理组细胞活力比未处理组明显下降，表明Aβ对神经细胞有显著的毒性，当有PTE存在的情况下，且浓度达到100μg/ml时，神经细胞活力有一定程度的恢复；（3）在10μg/ml PTE处理组时，CHO-APP/BACE1细胞分泌Aβ水平已经有显著下降（P0.01），并呈浓度依赖性；（4）荧光显微镜下观察发现，相比对照组，PTE处理后的神经细胞的细胞质内有更多的绿色圆点结构，即被染色的自噬小泡；（5）Western blot结果表明，随着给药浓度增加，LC3蛋白逐渐由I型向II型转变，自噬标志物LC3II/LC3I逐渐增加；（6）Western blot结果显示，自噬的抑制性激酶mTOR磷酸化水平随着PTE浓度升高逐渐下降，其下游的p70s6k磷酸化水平也随之降低。位于mTOR上游，能够抑制mTOR活化的激酶AMPK和Raptor磷酸化水平升高，而另外一个通路中能够促进mTOR活化的Akt则没有明显变化。结论：当PTE在100μg/ml以下时，对神经细胞活力没有影响，且有一定的细胞保护的作用；Western blot结果表明PTE可能是通过激活细胞AMPK/Raptor通路，抑制了mTOR和p70s6k的活化，诱导自噬作用增强，增强的自噬途径促进细胞清除过多的Aβ，，减少Aβ的分泌。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16

【参考文献】

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