甲基苯丙胺调节的TRPC1和Trx-1相互作用的研究

发布时间：2018-05-09 19:04

本文选题：瞬时受体电位阳离子通道1 + 硫氧还蛋白-1　；参考：《昆明理工大学》2017年硕士论文

【摘要】：甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)的外表与冰相似,一般称其为“冰毒”,是一种中枢神经系统的苯丙胺类兴奋剂。其成本低廉、见效快、作用时间长、滥用率逐年增加。METH长期服用可以导致强迫觅药行为,但发病机制不清,可能与遗传、环境、氧化应激有关。因甲基苯丙胺分子结构与多巴胺(dopamine,DA)相似,可与多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)结合,使DA释放增加,从而刺激多巴胺受体(dopaminereceptor,DR),刺激大脑内的多巴胺能神经元,使机体产生兴奋和愉悦的感觉,长期用药则导致成瘾。中脑腹侧被盖区(Ventral Tegmental Area,VTA)及其投射区伏隔核(nucleus accumbens,NAc)、前额叶皮质(prefrontal cortex,PFC)称为中脑边缘多巴胺系统,与成瘾相关。甲基苯丙胺成瘾涉及的分子较多,如多巴胺受体、cAMP 反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)、AFosB 蛋白、细胞周期依赖蛋白激酶 5(Cyclin-depdentkinase5,Cdk5)等。瞬时受体电位阳离子通道 1(transient receptor potential channel,TRPC1)是一种非选择性阳离子通道,铆钉在细胞膜上,调节钙离子内流入内质网的钙库。TRPC1 活性与活性氧(reactive oxygen species,ROS)有关。硫氧还蛋白-1(Thioredoxin-1,Trx-1)广泛存在于原核和真核生物中,具有抗氧化、促进细胞增殖、调节基因转录及抗凋亡等作用。Trx-1与硫氧还蛋白-1还原酶(Thioredoxin-1 reductase,TR)、烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)共同组成硫氧还蛋白-1系统,对神经细胞具有一定的保护作用。Trx-1在胞外可以活化膜上的TRPC1,进而参与调节TRP通道。有关TRPC1在甲基苯丙胺成瘾中的调节作用,及甲基苯丙胺作用后Trx-1与TRPC1相互作用关系目前未见报道。本研究利用甲基苯丙胺诱导的条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)模型和核团定位注射的技术,探索了 TRPC1调节甲基苯丙胺诱导的CPP作用以及机制,TRPC1与Trx-1在甲基苯丙胺诱导CPP形成后的相互作用机制。本论文的主要研究结果:我们发现在PC12细胞中,在甲基苯丙胺的刺激下,Trx-1蛋白的表达增加,而在小鼠中的表达明显降低。在小鼠VTA区双边注射TRPC1特异性干扰RNA,构建VTA区低表达TRPC1小鼠,并比较野生型/阴性对照组和低表达组甲基苯丙胺所致的CPP差异。与野生型/阴性对照组相比,低表达组甲基苯丙胺诱导的小鼠CPP的作用增强不明显,考虑为天花板效应。蛋白质免疫印迹技术表明低表达TRPC1小鼠的VTA区和NAc区结果相同:甲基苯丙胺导致Trx-1表达明显降低,甲基苯丙胺作用后D1R、CREB、△FosB以及CDK5的表达增加,而TRPC1低表达小鼠甲基苯丙胺作用后,D1R、CREB、△FosB以及CDK5的表达进一步增加。在低表达Trx-1后,TRPC1蛋白的表达降低,在低表达TRPC1后,Trx-1蛋白的表达也有所降低,可见,Trx-1和TRPC1存在相互的调节作用。总结:该研究证明甲基苯丙胺诱导CPP形成后,TRPC1与Trx-1蛋白表达降低,VTA区TRPC1低表达尽管甲基苯丙胺所致CPP形成无增强(天花板效应),但成瘾相关分子表达增高。Trx-1和TRPC1存在相互的调节作用。因此,TRPC1将是甲基苯丙胺成瘾治疗的新靶点。
[Abstract]:The appearance of methamphetamine ( METH ) is similar to that of ice , generally referred to as " ice poison " It is a kind of amphetamine - type stimulants in the central nervous system . It has low cost , quick response , long acting time , and increased abuse rate . The mechanism of METH may be related to genetic , environment and oxidative stress . Because of the similarity of the molecular structure of methamphetamine and dopamine ( DA ) , it can stimulate dopamine receptor ( DR ) and stimulate the dopaminergic neurons in the brain . TRPC1 and Trx - 1 were induced by methamphetamine in both prokaryotic and eukaryotic organisms . The effects of TRPC1 and Trx - 1 on TRPC1 and TRPC1 were significantly lower than those of wild type / negative control group . The expression of Trx - 1 protein decreased and the expression of Trx - 1 and TRPC1 was decreased after the low expression of TRPC1 . Conclusion : The expression of TRPC1 and Trx - 1 protein decreased in TRPC1 and TRPC1 , but the expression of TRPC1 in VTA region was higher than that of TRPC1 .

【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R749.64

【参考文献】