去势及雄激素补充治疗对SAMP8小鼠MCI期学习记忆能力及海马的影响

发布时间：2018-06-20 12:29

  本文选题：SAMP8小鼠 + 轻度认知功能障碍　； 参考：《河北医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：应用快速老化SAMP8小鼠作为研究对象，观察轻度认知功能障碍期（MCI）去势及双氢睾酮（DHT）补充治疗后其行为学和形态学的变化，以明确MCI发展为阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）的危险因素，为AD的早期预防和早期治疗提供实验依据。 方法：选用健康雄性5月龄SAMP8小鼠41只。随机分为假手术组（简称P8组）、去势组、去势＋DHT补充治疗组（简称DHT组）。去势组和DHT组小鼠去除睾丸。DHT组于去势术后1天给予颈背皮下注射DHT1mg/(kg·day)，其余各组注射等量医用玉米油，每天上午注射1次，共注射60天。所有小鼠饲养于正常温控、光照和自由饮食条件下。选取17只健康雄性SAMR1小鼠作为同源正常对照组（简称R1组）。 1.血清睾酮含量的测定：选用5月龄R1组和P8组以及7月龄R1组、P8组、去势组和DHT组小鼠，每组各5只。各组小鼠采取断头取血，静置后，3000转室温离心20分钟，取上清，-20℃保存待测。采用碘[125I]睾酮放射免疫分析试剂盒检测血清睾酮含量。 2. Morris水迷宫实验：每组选用7只小鼠，将各组小鼠置于迷宫实验室环境下饲养2天。训练在每天上午9:00～11:00进行。定位航行实验：将Morris水迷宫平均分为4个象限，平台放入第Ⅰ象限中。小鼠分别自4个象限同一点面向池壁进水，视频采集系统跟踪并记录小鼠找到平台所需的时间，实验共进行5天。空间探索实验：第6天撤掉平台，记录小鼠120秒内跨越平台的次数。 3.组织切片的制备及染色观察：Morris水迷宫实验结束后，各组小鼠6!水合氯醛腹腔注射麻醉，开胸暴露心脏，将输液针刺入左心室，同时剪开右心耳，用生理盐水快速冲洗，，4!多聚甲醛灌注。自上丘至视交叉节段取脑组织，用刀片把脑组织从正中矢状位分为左右两半，一半用于Golgi染色，一半制备成石蜡切片，分别用于HE染色、Nissl染色和抗Aβ免疫组织化学染色。 结果： 1.血清睾酮含量的测定结果：5月龄和7月龄R1组血清睾酮含量高于同月龄P8组。两组7月龄小鼠较5月龄小鼠血清睾酮含量均下降，但P8组小鼠下降程度（28!）明显大于R1组（5!）。 2. Morris水迷宫实验结果：P8组逃避潜伏期显著长于R1组（P0.05）；去势组逃避潜伏期显著长于其它各组（P0.05）；DHT组逃避潜伏期较去势组明显缩短（P0.05），但与P8组相比差异无统计学意义（P0.05）。R1组跨越平台次数多于其它各组(P0.05)，去势组跨越平台次数明显少于P8组和DHT组（P0.05），P8组和DHT组相比差异无统计学意义（P0.05）。 3. HE染色结果：R1组海马神经元排列紧密整齐，CA1区结构正常。P8组神经元排列较疏松紊乱，细胞层数减少。去势组细胞排列紊乱、疏松，海马CA1区神经元弥漫性空泡变性，核固缩、深染明显。DHT组神经元细胞的病理改变较去势组有明显的改善。 4．Nissl染色结果：R1组海马神经元形态规则，排列整齐且密集，细胞数与其它各组相比有统计学意义（P0.05）。P8组海马神经元尼氏体较稀疏，部分细胞核深染、固缩。去势组海马神经元排列稀疏、紊乱，较多细胞核固缩、浓密深染，胞浆内尼氏体减少。DHT组与去势组相比细胞数增加，差异有统计学意义（P0.05）。DHT组与P8组相比无差异（P0.05）。 5．Aβ免疫组织化学染色结果：R1组海马CA1区Aβ阳性细胞数和吸光度与其它各组相比减少，差异有统计学意义（P0.05）。DHT组阳性细胞数和吸光度与去势组相比减少，差异有统计学意义（P0.05），但与P8组相比差异无统计学意义。 6．Golgi染色结果：R1组海马CA1区第二、三级树突棘排列整齐且密集，形态规则，树突棘密度为1.30±0.17/μm，与其它各组相比差异有统计学意义（P0.05）。P8组树突棘密度为1.16±0.09/μm。DHT组树突棘密度1.15±0.07/μm较去势组树突棘密度0.78±0.04/μm明显增多（P0.05），但与P8组相比差异无统计学意义（P0.05）。 结论： 1．SAMP8小鼠从进入MCI期（5月龄）发展至AD期（7月龄），血清睾酮水平下降程度明显高于SAMR1小鼠，提示SAMP8小鼠雄激素水平降低在某种程度上可能是发展为痴呆的危险因素。 2．SAMP8小鼠MCI期去势可加重学习认知功能障碍并导致海马神经元疏松紊乱、肿胀变性，凋亡数目增加，神经元大量丢失以及Aβ沉着增加。提示雄激素缺乏能加速其向AD发展的进程。 3．SAMP8小鼠去势后给予雄激素补充治疗能逆转学习记忆能力下降和海马神经元病理损伤，延缓去势所致的向AD发展的快速进程。
[Abstract]:Objective : To investigate the behavioral and morphological changes of mild cognitive impairment ( MCI ) and dihydrotestosterone ( DHT ) after the treatment of mild cognitive impairment ( MCI ) and dihydrotestosterone ( DHT ) during the treatment of Alzheimer ' s disease ( AD ) , and to provide experimental basis for early prevention and early treatment of AD .

Methods : Forty - four healthy male 5 - month - old mice were randomly divided into two groups : sham operation group ( group P8 ) , castration group , castration + DHT replacement therapy group ( DHT group ) .

1 . Determination of serum testosterone level : 5 months old R1 group and P8 group and 7 month - old R1 group , P8 group , ovariectomized group and DHT group mice were selected . Each group was divided into five groups . Each group of mice took blood and left standing , centrifuged at 3000 rpm for 20 minutes , the supernatant was collected , and the supernatant was stored at -20 鈩

本文编号：2044262