外源性硫化氢对PC12细胞APP的α代谢途径的调控研究

发布时间：2019-08-20 16:53

【摘要】：目的 观察硫化氢(H2S)的前体物质硫氢化钠(NaHS)对嗜铬细胞瘤细胞(PC12)存活与生长的影响,获取对细胞存活与生长的最佳实验浓度；观察硫氢化钠(NaHS)对淀粉样前体蛋白(APP)α代谢途径及α-分泌酶的影响,探讨外源性H2S对该代谢途径的作用是否与α-分泌酶相关。 方法 以体外培养的PC12细胞为研究对象,用硫氢化钠(NaHS)作外源性H2S供体。实验设空白对照组、NaHS10μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组、200μmol/L组、500μmol/L组和1000μmol/L组,共8组。按分组浓度分别处理PC12细胞24h后,用MTT法检测细胞存活与生长,观察不同浓度NaHS对细胞存活的影响,筛选出适合实验的NaHS浓度。按适合实验浓度处理PC12细胞后,Western blot法检测细胞培养上清液中APP、ADAM10和ADAM17蛋白水平,ELISA法检测p-淀粉样蛋白40(Aβ40)、Aβ42、可溶性APP片段α(sAPP-α)和可溶性APP片段β(sAPP-β)水平。观察不同浓度NaHS对APP代谢和α-分泌酶活性的影响。 结果 1.PC12细胞的存活与生长MTT法检测结果显示,随着NaHS浓度(10μmol/L-200μmol/L)的增加,PC12细胞的存活与生长越好(P0.05)；其中对培养神经元存活的最佳NaHS浓度是100μmol/L和200μmol/L(P0.05)。随着NaHS浓度(500μmol/L～1000μmol/L)的增加,细胞的生长活力下降。500μmol/L和1000μmol/LNaHS浓度时对培养神经元有毒性损伤作用。 2.APP蛋白表达与对照组相比较,不同浓度NaHS组的APP蛋白表达水平无明显差异(P0.05)。 3. sAPP-α、A β40、A β42和sAPP-β蛋白表达与对照组相比较,随着NaHS浓度的增加(10-200μmol/L),不同浓度NaHS组sAPP-α蛋白表达水平增高,而Aβ40、A β42和sAPP-β蛋白表达水平降低,且具有浓度相关性。各组间比较差别均有显著性差异(P0.05)。 4. ADAM10和ADAM17蛋白表达不同浓度NaHS组的ADAM10和ADAM17蛋白表达水平较对照组增高,且随着NaHS浓度(从10-1001μmol/L)增加,蛋白表达水平呈递增趋势(P0.05),说明NaHS增强了PC12细胞的α-分泌酶活性。100μmol/L和200μmol/LNaHS组的ADAM17表达水平无明显差异(P0.05),但100μmol/LNaHS组的ADAM10蛋白表达水平最高(P0.01)。 结论 1.100μmol/L和200μmol/L浓度的NaHS更利于体外培养的PC12细胞存活和生长,500μmol/L和1000μmol/L浓度的NaHS对细胞有毒性伤害作用； 2.外源性H2S能上调体外培养PC12细胞的sAPP-α,减少Aβ40、A β42和sAPP-β病理产物的生成,即增强APP非淀粉样物质代谢途径(α代谢途径)。外源性H2S能增加ADAM10和ADAM17蛋白表达,即增强α-分泌酶的活性。外源性H2S增强APP非淀粉样物质代谢途径(α代谢途径)作用可能与增强α-分泌酶活性有关。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R749.16

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