蛋白磷酸酯酶-2A调节淀粉样前蛋白体磷酸化及Aβ生成的机制

发布时间：2019-09-26 02:14

【摘要】：背景：Aβ分泌异常增多导致的老年斑沉积是阿尔茨海默病特异性的病理改变之一。淀粉样前体蛋白(APP)由6-分泌酶切割生成一段具有氨基末端可溶性的片段(sAPP)和羧基末端片段(CTF)。CTF片段被γ-分泌酶继续切割产生淀粉样蛋白Ap多肽。苏氨酸668(Thr668)位点位于APP的细胞内区域,它能够被体内多种蛋白激酶,如糖原合成酶激酶3p、细胞周期蛋白依赖激酶5、细胞分裂周期蛋白2和c-jun氨基末端激酶等磷酸化,从而导致APP异常剪切增强以及Aβ分泌增多。本组前期的研究发现,采用慢病毒感染hAPP转基因鼠,特异性下调蛋白磷酸酯酶2A(PP-2A)体内特异性抑制性蛋白12PP-2A后,使PP-2A活性升高的同时,下调APP磷酸化水平,降低转基因鼠脑内Aβ水平。这些研究结果提示,作为AD病理改变过程中一种重要的丝/苏氨酸磷酸酯酶,PP-2A可能通过影响APP的苏氨酸668位点磷酸化水平进而调节Aβ的水平。 目的：探讨PP-2A能否影响APP苏氨酸668位点磷酸化水平,从而调节Aβ的分泌。 方法：本实验利用稳定转染人APP的N2a细胞(N2a/APP),给予N2a/APP细胞冈田酸(OA)或者DES (C6-ceramide)处理,和OA脑立体定位注射SD大鼠的海马区域,或瞬时转染PP-2A过表达质粒24小时后,通过免疫印记检测总APP、磷酸化APP、APP-CTF的水平,同时采用试剂盒检测PP-2A和分泌酶的活性。 结果：在本研究中,我们发现(1)通过OA抑制PP-2A活性后,能够显著增加APP的磷酸化水平。(2)DES激活PP-2A或者过表达PP-2A能够降低APP的磷酸化水平。(3)抑制PP,使APP磷酸化水平降低。(4)SD大鼠经海马注射OA后能够引起磷酸化APP水平的显著增加.(5)经OA处理后N2a/APP细胞中p-、Y-分泌酶的活性显著上升,a-分泌酶活性则没有明显变化；Ap水平升高。 结论：我们发现PP-2A可通过调节APP磷酸化水平以及p、γ-分泌酶活性而调控Aβ水平
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R749.16

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本文编号：2541764