抗体及天然药物对靶细胞在胞外Abeta42基质上粘附的影响

发布时间：2019-11-04 12:23

【摘要】：阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是以认知功能障碍和记忆损害为主要临床特征的中枢神经系统退行性疾病。患者脑内出现由beta-淀粉样蛋白（beta-amyloid peptide，Abeta）聚集形成的老年斑（senile plaques，SP）是最主要的病理学特征。越来越多的研究证据表明，当Abeta42在体内达到一定浓度时彼此之间会发生聚集，形成不同聚集程度的聚集体，而Abeta42的单体和聚集体在AD的发病机制中起着关键性的作用。就目前的研究来看，神经毒性最强的Abeta42聚集体是Abeta42寡聚体。但Abeta42通过何种方式聚集，以及Abeta42神经毒性的机理一直不为人所知。在体内，Abeta42是由淀粉样前体蛋白（amyloidprecursor protein，APP）经beta-分泌酶和gamma-分泌酶的顺次切割而产生的，所以APP与AD的发生、发展存在着密切的关系。APP是一类I型跨膜蛋白，研究表明，APP分子间能够发生相互作用，形成二聚体，并且Abeta42也能与APP相互作用，并促进APP聚集，但是其相互作用的具体位点并未明确。 本文首先制备了Abeta42单体和三种聚集体。通过透射电镜观察并确认了单体和三种聚集体的形态，验证其准确性。为了验证APP与Abeta42单体和三种聚集体是否存在相互作用，本文开展了以下研究：以Abeta42单体和三种聚集体为基质，包被于高粘性的96孔板中，以非洲绿猴肾细胞COS7为模型细胞，将表达APP的转染细胞加入已包被基质的96孔板中进行粘附实验，用MTT法检测粘附细胞数。结果表明，转染组的靶细胞在Abeta42单体和三种聚集体上的粘附数明显高于非转染组，即APP与Abeta42单体和三种聚集体均存在相互作用，，并通过这种相互作用介导靶细胞在Abeta42单体和三种聚集体上的粘附，其强度与Abeta42的浓度成正比。 然后，本文分析了十三种抗Abeta42抗体对粘附的影响。结果表明，十三种抗Abeta42抗体均能抑制转染了APP的COS7细胞在Abeta42单体和三种聚集体上的粘附，即这十三种抗体均能不同程度地抑制APP与Abeta42四种存在形式之间的相互作用。根据抗原的类型不同，针对Abeta42单体和三种聚集体的抑制强度也各有不同。并且实验表明，抗体对靶细胞表面的APP与Abeta42四种形式间相互作用的抑制效应，除了通过与基质Abeta42竞争APP上相互作用区域之外，还可能通过其他途径介导了对细胞粘附的抑制。 最后，我们检测了两种天然药物——母菊黄酮、母菊内酯（以下简称中药A中药B）对Abeta42单体和三种聚集体聚集程度的影响以及对APP与Abeta42四种形式间相互作用的影响。结果表明：利用透射电镜观察发现中药A、中药B均有抑制Abeta42四种不同形式的聚集和使纤维化的Abeta42解聚的作用。并且中药A、中药B均可以抑制转染了APP的COS7细胞在Abeta42四种聚集形式上的粘附，其中中药A只有在较高浓度时才能对Abeta42单体产生明显抑制作用。在同一浓度下，中药A对靶细胞上APP与Abeta42寡聚体之间相互作用的抑制效应更强，而中药B对APP与Abeta42四种不同形式之间相互作用的抑制效应相似。 本文的研究结果为APP与Abeta42间相互作用的研究奠定了基础，并为Abeta42的致病机理的研究提供了依据。此外，在AD的免疫治疗和天然药物治疗方面，分析靶细胞在外基质上粘附的影响为抗体和药物的有效性的检测提供了一种方便、快捷的途径。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R749.16

【参考文献】

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本文编号：2555625