SERMs对阿尔兹海默症Aβ细胞模型神经保护作用的研究

发布时间：2020-03-15 10:05

【摘要】：阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)是一种最常见的老年痴呆症,患者常常为中老年人,尤其是绝经期的妇女。随着现代社会人口结构老龄化的发展,已成为继心脏病、癌症、卒中之后第四类致死原因。目前临床上用于抗AD的药物有很多种,如谷氨酸受体拮抗剂、β淀粉样蛋白靶向药物和雌激素替代疗法等。但现存药物都是以预防和减缓病情发展为主,且有很多不良之处,如引起毒副作用。最新研究发现,AD主要发病人群为绝经后的妇女,由于绝经后女性体内雌激素发生了变化而产生影响,体内分泌的雌激素通过和受体结合产生作用,具有提高记忆力,改善认知能力的功能。但是,雌激素补充疗法最大的弊端就是用药时间长,对子宫内膜壁有刺激作用,可能导致乳腺癌。选择性雌激素受体调节剂(Selective estrogen receptor modulators,SERMs)与雌激素作用相似,通过与不同组织的雌激素受体(Estrogen receptor,ER)结合而表现出不同的作用,使其在激动中枢神经系统时并不会激动其他受体,从而减少雌激素的毒副作用。因此,SERMs成为雌激素的替代药物。基于以上理论,本课题选用SERMs作用于体外建立的神经保护模型,检测药物的神经保护作用。本实验选用的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12,将其诱导分化成为所需的神经细胞,然后建立Aβ1-42损伤模型,检测SERMs的代表药物他莫昔芬(TAM)的神经保护作用。本课题主要包括以下内容:1、选用PC12细胞将其诱导成为神经细胞。加入诱导PC12细胞分化的神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)。采用的实验方法是:细胞形态学观察法、Real-time PCR、Western blot免疫印迹法。通过检测神经标志物的基因水平和蛋白表达情况,发现神经标志物UCH-L1、神经丝蛋白(NFP)和微管相关蛋白2(MAP2)的基因水平均呈现1.2-2倍的增加。微管相关蛋白2的表达量在各个浓度的NGF处理组中随着NGF剂量的增加而变化,且NGF最佳诱导分化的浓度选为50μg/L。2、建立Aβ1-42神经细胞损伤模型。将诱导后的细胞给予Aβ1-42处理,造成阿尔兹海默症体外神经细胞模型,运用CCK8法检测细胞存活率和活力,倒置显微镜观察细胞凋亡前和凋亡后的生理变化,JC-1荧光法检测细胞线粒体膜势能的变化。实验结果表明,向神经细胞加入Aβ1-42进行损伤,细胞形态改变、细胞凋亡显著增加、细胞线粒体膜电位显著下降,且筛选出Aβ1-42最适损伤浓度为20μmol/L。3、选用选择性雌激素受体调节剂(SERMs)的代表药物他莫昔芬(TAM)研究其对神经细胞的保护作用。通过处理Aβ1-42损伤的细胞,采用CCK8法检测细胞活力,Hoechst 33258染色法观察细胞核形态变化,JC-1荧光法检测细胞线粒体膜势能变化,以及采用Western blot免疫印迹法检测Bax、Bcl-2蛋白量的表达改变。本阶段实验结果显示:雌激素类药物及TAM对Aβ1-42引起的神经元损伤具有一定的保护细胞作用。经过JC-1荧光检测法得出结论,TAM可以一定程度地阻止细胞线粒体膜势能下降,对细胞线粒体具有一定的保护作用。结论:本课题已完成PC12细胞诱导分化和Aβ损伤模型的建立工作,并验证了SERMs类药物TAM具有一定的神经保护作用。
【图文】：

PC12细胞,细胞形态,标志物,处理组

2450μg/L NGF 组 70μg/L NGF 组图 2.1 不同浓度（μg/L）NGF 处理 PC12 细胞后的细胞形态2.3.2 NGF 对 PC12 细胞神经标志物基因水平的影响对加入 NGF 培养的 PC12 细胞的泛素羧基末端水解酶-1、神经丝蛋白 NFP和微管相关蛋白 2 MAP2 进行 RNA荧光定量 PCR分析结果表明，PC12细胞分别用 10μg/L、30μg/L、50μg/L 和 70μg/L NGF 处理 72h 后，这三种神经元标志物 UCH-L1、NFP、MAP2 的基因均有明显上升的趋势。而且 50μg/L NGF 处理组相比于 10μg/L、30μg/L 和 70μg/L NGF 处理组的 NFP、UCH-L1 和 MAP2 的基因变化更为明显，增加倍数更大(图 2.2，，图 2.3，图 2.4)。

细胞,基因

不同浓度（μg/L）NGF处理细胞后UCH-L1基因水平的变化
【学位授予单位】：华侨大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R749.16

【参考文献】