BED-CEIA方法用于四川省2006年吸毒哨点HIV新近感染率的研究

发布时间：2020-03-26 10:51

【摘要】： 本文使用的“针对HIV病毒BED三个亚群的酶免疫捕获方法(BED-CEIA)”是一种定量酶联免疫法。该实验固相载体包被羊抗人Ig-G，捕获血浆或血清中的抗HIV-1抗体和非抗HIV-1抗体。通过捕获的抗HIV-1抗体和非抗HIV-1抗体的相对数量可间接检测样品中抗HIV-1特异性Ig-G抗体占总Ig-G抗体的比例。在HIV感染者体内，根据HIV特异性lgG占总IgG抗体的比例随着感染时间的延长而增高，，可计算感染者大致的感染时间，从而确定是否新近感染。 主要检测步骤： 1、按1：100稀释样本和对照，对照包括高滴度HIV-1抗体人血清的强阳性对照、低滴度HIV-1抗体人血清的弱阳性对照、不含HIV-1抗体人血清的阴性对照和低滴度HIV-1抗体人血清的校准品对照。 2、稀释样本加入包被羊抗人Ig-G的微孔板中，37℃孵育1h，洗板。 3、将包含gp41的B，E和D表位的合成HIV生物素-抗原肽加入微孔板，37℃孵育1h，洗板。 4、将稀释好的链亲和素—过氧化物酶结合物(为磷酸盐缓冲液与丙三醇的混合液内含酶结合物)加入微孔板，37℃孵育90min，洗板。 5、加入TMB底物，37℃，严格孵育15min进行显色。 6、加入1mol／L H_2SO_4中止反应，酶标仪450nm(参考波长630nm)测定OD值。 HIV-1 BED发病率检测的酶联免疫实验(ELISA)，通过试剂盒自带的标准品OD值来标化样本OD值以及阴性对照、弱阳性对照和强阳性对照OD值，以达到标化定量的目的。另外，初检的对照和复核检测的样本及对照均设置3个平行孔，并在计算结果时取中位数值，可有效控制操作误差。BED检测分两个步骤，原理完全相同，重复检测的目的是为了提高试验的准确性，避免操作误差和偶然误差。该试验具有以下特征： 1、血清稀释100倍来检测早期或既往感染。只要抗HIV-1抗体和非抗HIV-1抗体的比例保持稳定，则该实验受稀释变化的影响小。 2、实验程序简单，易于稀释，精确性较高。 3、应用多种亚型的gp41抗原可等效的检测到HIV-1多种亚型的抗体，有相似的血清阳转持续期。 4、HIV-1 BED发病率检测的EIA实验应用统一的标准，如阳性判断值cutoff，血清阳转持续时间或窗口期等，可应用于HIV-1多种亚型的人群。 由于该方法在个体水平上可能产生相当数量的假阳性和假阴性，而在人群水平上假阳性和假阴性数量接近，几乎可以相互抵消，所以只能用于人群流行病学研究调查，不能用于个体诊断。 本文通过收集四川省2006年吸毒哨点人群初筛阳性样本，进行蛋白印迹法(WB)检测，并对WB检测确认阳性样本进行新近感染检测，对我省2006年吸毒哨点人群进行了新近感染率的初步调查。检测结果显示HIV-1抗体确认阳性率为12.04％，新近感染率(发病率)为1.36％，年新近感染率(年发病率)为3.19％，其95％可信区间(CI)为(4.12％～2.26％)。结合流行病学资料，结果显示我省吸毒人群新近感染率尚处于一个较高水平，该人群的干预、宣传措施仍需加强。本文率先在我省使用了用BED-CEIA方法测定HIV感染人群中的新近感染率，弥补四川省在HIV发病率研究方面的空白。
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R749.64;R512.91

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本文编号：2601342