转染EGFP的人羊膜上皮细胞侧脑室移植治疗阿尔茨海默病模型鼠的实验研究

发布时间：2020-04-16 06:01

【摘要】： [目的] 1.繁殖和鉴定阿尔茨海默病APPSWE/PS1DE9转基因模型鼠,为进一步的研究提供理想的动物模型。 2.观察人羊膜上皮细胞在阿尔茨海默病模型鼠侧脑室移植后的存活、迁移及分化情况。 3.观察人羊膜上皮细胞对阿尔茨海默病模型鼠的行为学、海马区乙酰胆碱神经递质及胆碱能神经元和胆碱能纤维的影响。 [方法] 1. 8月龄母代及子代小鼠均用PCR检测鉴定APPSWE基因。水迷宫和明暗箱观察行为学,刚果红及六氨银染色观察病理变化。 2.转染EGFP的人羊膜上皮细胞,侧脑室移植,荧光镜下观察人羊膜细胞的存活及迁移情况,免疫组化检测Oct-4 and Nanog在hAECs中的表达。 3.将基因鉴定后的转基因阳性模型和阴性模型随机分为四组:模型假手术组,模型治疗组,野生型假手术组,野生型治疗组。治疗组侧脑室注射人羊膜上皮细胞,假手术组侧脑室注射等量的PBS。移植后5周,水迷宫和明暗箱观察行为学变化;高效液相电化学仪观察海马区乙酰胆碱的含量;乙酰胆碱酯酶染色观察胆碱能神经元和胆碱能神经纤维的变化。 [结果] 1.雄性和雌性APPswe/PS1小鼠互交,32d内产8窝60只,全部存活。PCR鉴定母代16只小鼠APPswe基因表达全部阳性;子代60只小鼠的43只APPswe基因表达为阳性,17只基因表达为阴性,阳性率为70.2% ,存活率为100%。APP基因片段大小为300bp,转基因鼠与野生型比较行为学有统计学差异(p0.05)。转基因模型鼠8月时在海马和皮层出现淀粉样蛋白沉积,被染成橘红色,野生型小鼠没有发现淀粉样蛋白的沉积。两组都没有发现神经元纤维缠结。 2.人羊膜上皮细胞在阿尔茨海默病模型鼠侧脑室内移植后5周可以存活并迁移至第三脑室,可表达干细胞的特异性标记物Oct-4和Nanog。 3.移植后5周,行为学观察转基因模型治疗组和假手术组比较有统计学意义(p0.01),正常野生型老年鼠假手术组和治疗组比较无统计学差异(p0.05),转基因模型治疗组和正常野生型老年鼠比较无统计学差异(p0.05);转基因模型治疗组和假手术组乙酰胆碱含量相比有统计学差异(p0.05),转基因模型治疗组和野生型小鼠乙酰胆碱含量比较无统计学差异(p0.05),野生型小鼠治疗组和假手术组乙酰胆碱含量比较无统计学差异(p0.05)。转基因模型组神经元纤维数量明显少于野生型鼠,转基因模型组治疗组比假手术组神经元纤维数量增加。 [结论]1.阿尔茨海默病APPSWE/PS1DE9转基因模型鼠通过雌雄交配能稳定遗传下去,在行为及病理上都与野生型鼠表现出显著的差异。 2.人羊膜上皮细胞具有干细胞的性质,移植后5周能在脑室中存活。 3.人羊膜细胞侧脑室移植对阿尔茨海默病APPSWE/PS1DE9转双基因模型鼠有治疗作用。改善AD鼠的症状,其机制可能与人羊膜上皮细胞释放的神经营养因子对神经元的保护作用,存活了更多的胆碱能神经元,增多的胆碱能神经元增加了海马区乙酰胆碱有关。
【图文】：

图 1 APPswe 基因的 PCR 基因鉴定原始图，图中 24 号为阴性鼠，，其余为基因表达阳性鼠。学结果组间比较发现野生型和模型组都具有明显的学习、记忆能力。鼠逃避潜伏期与野生型相比有显著性差异（p<0.05），见表 1小鼠学习能力检测 水迷宫逃避潜伏期p N test1 test2 test3 test4 15 98.82±15.02 87.43±15.98 60.77±20.09 39.85±9 15 109.7±14.97 89.35±15.28 75.18±16.39 53.9±6较：照组:p1-2=0.027, p2-3=0.0001, p3-4=0.0008模型组:p1-2=0.005, p2-3=0.0118, p3-4=0.0002

小鼠记忆能力检测撤消平台后，小鼠在水迷宫连续游泳 120s，小鼠到达原平台位小鼠的平均值为 3.333±1.665，转基因模型 15 只小鼠的平1。模型组小鼠平台次数与野生型相比有显著性差异（＊p<0.05）
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R749.16

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10 郭U

本文编号：2629466