β淀粉样蛋白对小鼠巨噬细胞系细胞RAW264.7的影响及机制研究

发布时间：2020-05-01 17:16

【摘要】：目的:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD),又称老年痴呆症,是一种神经退行性疾病,病理特征表现为患者脑中存在由于β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)沉积形成的老年斑和由于Tau蛋白异常磷酸化导致的神经细胞内神经原纤维缠结,同时普遍伴随脑内炎症反应和神经干细胞功能的激活。AD炎症反应主要由脑内小胶质细胞、星形胶质细胞,穿过血脑屏障的外周单核细胞等被激活,分泌炎性细胞因子、趋化因子等引起~([1])。而在AD脑中炎症反应与其发生发展有着密不可分的关系。其中AD患者和脑内注射Aβ大鼠外周血单核细胞均高表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)受体β亚基—CSF2RB,但AD患者CSF2RA(GM-CSF受体α亚基)表达与同龄对照老年人比无显著差异。上述结果提示CSF2RA和CSF2RB的表达差异是与脑内Aβ炎症相关的。单核细胞入脑后会分化为巨噬细胞,为了研究Aβ对巨噬细胞GM-CSF受体表达的影响与巨噬细胞功能的关系,我们用Aβ1-42合成肽在体外刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,与LPS刺激结果相对比研究Aβ1-42对RAW264.7细胞炎症因子表达、分泌的影响及机制。研究方法:RAW264.7细胞分别经过LPS与Aβ1-42刺激,RT-PCR和Western Blot检测GM-CSF受体CSF2RA和CSF2RB的表达水平;ELISA检测在Aβ1-42刺激下的炎症因子GM-CSF、IL-1β、IL-6和TNF-α水平;采用TLR4抑制剂分别干预LPS和Aβ1-42处理后的RAW264.7细胞,检测CSF2RA与CSF2RB受体的表达变化,炎症因子IL-1β、IL-6的释放;流式细胞术检测Aβ1-42刺激的RAW264.7细胞分化类型。实验结果:RAW264.7细胞表面GM-CSF受体CSF2RA与CSF2RB在LPS与Aβ1-42处理后表达均升高,且CSF2RA先于CSF2RB升高,与对照组相比具有显著性差异(p0.05);炎症因子IL-6与IL-1β在Aβ1-42刺激后分泌增加,并且TLR4在Aβ引起的炎症因子的释放中发挥作用。结论:1、巨噬细胞RAW264.7在Aβ1-42/LPS刺激下,CSF2RA与CSF2RB均升高,CSF2RA先于CSF2RB升高。2、Aβ1-42通过TLR4受体的作用使巨噬细胞炎症因子IL-1β和IL-6分泌增加。
【图文】：

RT-PCR技术,技术检测,单因素方差分析,方法

11图 2 CSF2RA 和 CSF2RB 在 RAW264.7 细胞上的表达；(A、B)：采用 RT-PCR 技术检测 CSF2RA 和 CSF2RB 的表达；(C)：采用 westernblot 方 CSF2RA 和 CSF2RB 的表达； (D)：CSF2RA 蛋白表达水平的统计分析；(E)：CSF2R达水平的统计分析。采用单因素方差分析，n=3，，*P<0.05 或**P<0.01

ELISA检测,炎症因子,文献表,硕士学位论文

中国医科大学硕士学位论文3 Aβ1-42 能够促进 RAW264.7 细胞炎症因子的释放文献表明，LPS 能刺激细胞释放 IL-1β、IL-6 和 TNF-α等炎症因子[18,19]，为一步研究 Aβ对巨噬细胞的促炎作用，我们检测了 Aβ1-42 刺激后 RAW264.7 细症因子的释放。结果表明, IL-6 在 12、24 和 48h 有升高(P㩳0.05)，在 72h 和明显升高（P㩳0.01）（图 3 A）；IL-1β在 12、24h 有升高(P㩳0.05)，在 48、h 有明显升高（P㩳0.01）（图 3 B），但是 TNF-α的表达没有明显差异（图 3些结果提示 Aβ对 RAW264.7 细胞具有促炎作用。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R749.16

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