海洛因依赖大鼠VTA的可塑性及其多巴胺神经元膜电流的研究

发布时间：2020-05-11 20:52

【摘要】：目的：检测海洛因依赖大鼠中脑腹侧被盖区(Vental tegment area, VTA)-伏隔核(Nucleu accumbens,NAc)突触的可塑性及其NMDA受体介导的多巴胺神经元膜电流的变化。方法：SD雄性大鼠80只(180-220g),随机分成对照组、海洛因依赖组(以下称依赖组)、海洛因戒断组(以下称戒断组)。按剂量递增原则,皮下注射海洛因,2次/d(9：00am,16：00pm),连续9d(首日剂量3 mg/kg,逐日递增海洛因3 mg/kg),第10d用纳络酮催促戒断,确定海洛因成瘾模型的建立。对照组按同样方式注射等量生理盐水。海洛因依赖模型建立后,依赖组继续给海洛因维持量(27mg/kg·d)。按大鼠脑立体定位图谱(Paxinos Watson,第3版)分别刺激VTA、NAc,并分别在NAc和VTA引导群体峰电位(Population spike, PS)(刺激参数：5V,200HZ,波宽300μs)。用TH免疫组织化学方法标记多巴胺(Dopamine, DA)神经元,并用脑片膜片钳技术记录由NMDA受体特异性激动剂(0.1μM,1μM和10μM)介导的VTA的DA神经元膜电流变化。结果：1.建立的海洛因依赖模型组大鼠催促戒断症状的评分符合成瘾模型评分标准。 2.海洛因依赖组分别高频刺激VTA和NAc,并分别在NAc和VTA引导LTP,其LTP的PS低于对照组和戒断组(P0.05)。3.海洛因依赖组VTA区NMDA受体介导的DA神经元膜电流减小(P0.05)。4.海洛因依赖组VTA的DA神经元TH免疫反应表达上调(P0.05)。结论：1.对照组、依赖组和戒断组VTA区在高频刺激后,在NAc能引导LTP,且依赖组LTP的PS小于对照组和戒断组。2.海洛因依赖组VTA的DA神经元TH免疫反应增强。3.海洛因依赖组NMDA受体介导的VTA区神经元膜电流减小。
【图文】：

示意图,测量参数,参数计算方法,上升支

图 1vTA和NAc脑区的定位 Fig1ThelocationofVTAandNAe 1.4.3LTP参数计算方法采用咫的幅值 (PSalnPlitude)这个参段分别指PS的上升支和下降支幅度，PS幅度

示意图,膜片钳全细胞记录,模式,示意图

②细胞封接在20一30℃室温下进行。灌流槽置于倒置显微镜载物台上，选择表面光滑、突起完整、折光性强的典型细胞作为研究对象进行膜片钳实验。拉制玻璃微电极、充灌适量的电极内液后，通过电极夹持器与放大器的探头相连(图3)。在倒置显微镜下先将选好的细胞移至视野的中间，再用定向推进器将电极尖端调至胞体的正上方，然后使用微操纵器让电极尖端缓慢靠近胞体。利用特定的测试方波判断细胞的封接状态(图4)。当电极尖端接触细胞表面时，记录得到的测试方波会因封接阻抗增大而产生相应的变化。此时再给予短暂的负压吸引，电极与胞膜之间的电阻会迅速增大至吉欧姆(10”Q)水平以上，膜与电极之间形成在机械和电学上都十分稳固的紧密封闭。此时的电极与细胞膜形成了“贴附式膜片”(cell一 attachedpatch)，在此基础上再给予负压吸破电极尖端的细胞膜，使细胞内液与电极内液相通，，形成“全细胞膜片” (wholecellpatch)，这时的一记录方式就是全细胞一记录。我们选择贴附式电阻达10G欧姆以上
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R749.6

【参考文献】