FMR1、XIST基因CpG岛甲基化检测方法的建立与CGGBP1蛋白的原核表达

发布时间：2020-05-25 22:23

【摘要】：目的:建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因(Fragile X mental retardation,FMR1)、X染色体失活基因(X chromosome inactivation,XIST)甲基化的实验方法。方法:用亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行脱氨基修饰。以修饰后的DNA为模板,用两对不同的引物:1对甲基化特异性引物和1对非甲基化特异性引物扩增FMR1基因(CGG)n重复序列区、FMR1和XIST基因的启动子区。PCR产物进一步克隆、测序。结果:以亚硫酸氢钠和对苯二酚脱氨基修饰后的DNA为模板进行PCR扩增,扩增产物与预期目的基因片段大小相符合,无非特异性扩增产物。测序结果表明,FMR1、XIST基因中CpG岛的非甲基化的碱基C转变为碱基U,而CpG岛中被甲基化的碱基C不改变。结论:成功地建立了检测FMR1、XIST甲基化的实验方法,为实验室诊断脆性X综合征提供了新的方法。
【图文】：

M:DNAmarker:1:AmPlfiieationofCGGBPIeDNA图1CGGBPIcDNA琼脂糖凝胶电泳分析FiglAgoarsegelelertoPhoersisofCPRrfamgentofCGGBPIeDNAM:DNAmarker;1:RecombinantPlas们。idwiht刀比的Hl和助”l;2:PRSTEAwihtB“优Hl和仰”1图2重组质粒pRSETA/CGGBPI的刀公功HI和助”I双酶切鉴定FiZgReeombinnatPlasmidRPSET^C/GGBPIidentifiedwhtiBmaHI和勒”Idigestion
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R749.99

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 陈雨亭,B.Bardoni,余珉,朱宁,吴冠芸,J.L.Mandel,沈岩;FMRP与TDG蛋白的相互作用[J];科学通报;1999年18期

2 楼蓉,梅品超,贡金英,朱宁,寇朝辉,吴冠芸,沈岩;脆性X智力低下蛋白与NDK/Nm23-H2的相互作用[J];中国医学科学院学报;2001年06期

，

本文编号：2680831