神经干细胞经侧脑室移植于血管性痴呆大鼠的研究

发布时间：2020-06-08 13:24

【摘要】：目的 1. 从新生大鼠海马中分离培养并鉴定神经干细胞,为神经干细胞的体外移植作准备。 2. 制作血管性痴呆大鼠动物模型,为研究血管性痴呆的发病机理和防治建立基础。 3. 探讨神经干细胞在血管性痴呆大鼠侧脑室的存活、迁移和分化,从而为神经干细胞的体内存活、迁移和分化机理研究和临床应用提供实验依据。方法 1. 利用无血清培养和单细胞克隆技术从新生大鼠海马分离具有单细胞克隆能力的细胞群并连续传代培养,获得大量细胞,采用免疫荧光细胞化学技术检测巢蛋白(Nestin)和分化后特异性成熟神经细胞抗原表达。 2. 采用永久性结扎大鼠双侧颈总动脉法(2-VO)建立血管性痴呆大鼠动物模型,结扎后30 天,用Morris 水迷宫定位航行试验和空间探索试验来检测大鼠的学习记忆能力变化,并在光镜下观察大鼠海马组织结构的变化。 3. 采用脑立体定位技术将5-溴-2’-脱氧尿苷( BrdU)标记的神经干细胞移植入血管性痴呆大鼠侧脑室内,饲养4 周后取脑,应用免疫荧光化学技术检测移植后细胞的存活、迁移和分化。结果 1. 从新生大鼠海马分离得到的细胞经无血清培养后,具有连续传代能力,能表达巢蛋白Nestin,经诱导分化后能表达神经元、神经胶质细胞的特异性抗原, 说明大鼠海马内存在神经干细胞。
【图文】：

手术中,大鼠,体重

验动物12 月龄健康 SD 大鼠 25 只（由南京军区福州总医院动物实验科提供），体重 512±93g。以 Y 型电迷宫实验筛选学习记忆良好的大鼠20 只 2.2.1），按照体重大小排列，由 Microsoft Excel 2003 产生 20 个随机机数字按照从小到大排列编号，取编号 1－10 为假手术对照组(n=10)20 为手术组(n=10)。法模型制作[14]用 2%戊巴比妥钠（40mg/kg 体重）腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位固定口，分离双侧颈总动脉剪断加结扎（图 1），缝合切口。假手术对照及结扎双侧颈总动脉外，其余和手术组相同。两组大鼠同条件饲养，进行 Morris 水迷宫实验。

Morris水迷宫,平台,所指,大鼠

大鼠每天训练 20 次。记录错误次数（EN）和 20 次训练总时间（TRT）。以 10次测试中连续 9 次出现正确反应为学会标准，并以 TRT=160s 和 EN=8 次为标准，其中有一项超过者则认为有学习障碍。24 小时后再检测其记忆保持能力。2.2.2 Morris 水迷宫[15]水迷宫的水池直径为 100cm，深 50cm，水深 45cm，水温 26±2℃，水面覆盖一层泡沫塑料屑，池壁 4 个等距离点将水池分为 4 个象限，任选一象限在其中央放置有机玻璃平台。平台无色透明，直径 6cm，高 43cm，平台没于水面下 2cm，水池周围参照物在实验过程中保持不变（图 2）。实验包括：（1）定位航行实验：实验历时 7 天，操作者将大鼠面向池壁从不同象限放入水中，记录大鼠找到平台的时间（逃避潜伏期）。如果大鼠 60s 内找不到平台，则由操作用小棒引导大鼠站上平台（图 3）。大鼠站立于平台 10s 后，将大鼠从平台上捉下，休息 30s，再按序由下一象限入水进行下一次实验。（2）空间探索实验：在第 8 天，撤除平台，大鼠从非平台象限入水，，记录 60s 内大鼠在平台象限的停留时间。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R749.16

【参考文献】