NGF对表达突变型APP的PC12细胞作用机理的实验研究

发布时间：2020-07-04 21:31

【摘要】：目的：阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是常见的老年人慢性退行性神经疾病，AD的主要病理学标志包括老年斑(SP)和神经原纤维缠结(NFTs)。SP的淀粉样沉积物主要成份是β-淀粉样肽(Aβ，包括Aβ_(40)和Aβ_(42))，由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，APP)分解而来，被认为在AD的发病中起着十分重要的作用。目前许多证据表明，APP基因的点突变、代谢异常及过表达所引起的Aβ聚集，是AD发病的重要原因之一。越来越多的研究证实AD存在多基因缺陷，包括APP、PS1、PS2、apoE4、ACT以及ERAB基因，且建立了许多AD转基因动物模型。然而，受不同内外环境的影响及不同的实验条件限制，不便于系统探讨AD特征性标志产物APP及Ap的表达及其对细胞的影响。目前，国外对AD病的致病机制的研究主要集中在转基因动物模型上，国内尚无通过转基因技术建立转基因AD细胞模型并使用NGF进行干预的报道。本研究旨在构建突变型APP基因序列的质粒并转染PC12细胞，观察APP及Aβ的表达、细胞形态及细胞周期的改变，并使用神经生长因子(NGF)进行干预，系统探讨AD重要致病因素APP及Aβ表达的分子机制及NGF对AD的治疗作用。方法： 1．质粒构建：NCBI网站上查找APP基因及其启动子的序列，
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R749.16
【图文】：

序列,野生型,测序,T载体

脑RNA电泳结果。1，Marker;2，抽提0.8%agaroseeleetrophoresisoffet模板扩增APP序列，PCR结束后，扩增产物进行琼脂20V，60分钟)，EB液中染色，可见P察结果并照相。经检测胶证实大小收纯化，连接到pGEM一T载体上，提质粒DNA后，0.%8琼脂糖凝胶检有特异条带。用测序引物测序，致(图1.2，1.3)。234567M

测序,质粒载体,饰片

4突变型质粒载体的克隆和构建以克隆的APP质粒载体DNA为模板，AT/IATZ，TA3/AT4为引物扩增，分别扩增得到了1485饰、767Pb片段(图1.4)，以扩增的PCR产物作模板，TAI/TA4为引物PRC扩增得到2250饰片段(图1.5)，经检测胶证实大小相同的PRC产物，用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收纯化，连接到pGEM一T载体上，挑取单克隆，将细菌

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