丁苯酞通过诱导自噬调控BV2小胶质细胞炎性反应的研究

发布时间：2020-07-28 10:16

【摘要】：目的:研究丁苯酞对Aβ_(25-35)诱导的BV2小胶质细胞炎性反应的影响及可能机制。方法:培养BV2小胶质细胞,将其分为空白对照组(Control)、模型组(Model)、丁苯酞组(NBP)和丁苯酞联合自噬抑制剂6-氨基-3-甲基嘌呤组(3-MA)。采用CCK-8法检测丁苯酞和Aβ_(25-35)对BV2小胶质细胞活力的影响,Western blot检测各组细胞自噬蛋白LC3B-Ⅱ和p62的表达情况,Real-time PCR检测自噬基因ATG5、Beclin1和炎性指标IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平。结果:Aβ_(25-35)浓度≥20?mol/L时对细胞生存率具有显著损伤作用,丁苯酞浓度≤40?mol/L细胞活力与未处理细胞基本无差异。Model组的炎性指标IL-1β、IL-6的mRNA表达量相较Control组明显上调(P0.05)。与Model组相比,NBP组的IL-1β、IL-6 mRNA表达量显著降低,ATG5、Beclin1 mRNA和LC3B-Ⅱ蛋白表达上调,p62蛋白明显减少(P0.05)。3-MA组与NBP组相比,IL-1β、IL-6mRNA表达增加,ATG5、Beclin1 mRNA和LC3B-Ⅱ蛋白表达降低,p62蛋白表达增加(P0.05)。结论:Aβ_(25-35)处理BV2小胶质细胞后相关促炎因子显著表达,说明Aβ_(25-35)是小胶质细胞活化的诱发因素。丁苯酞能够降低Aβ_(25-35)诱导的BV2小胶质细胞炎性反应水平,亦可上调自噬相关基因和蛋白的表达,并且自噬效应受到抑制时促炎因子的表达量明显增加,说明丁苯酞可通过诱导自噬下调BV2小胶质细胞炎性反应水平进而发挥神经保护作用。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R749.16
【图文】：

中国医科大学硕士学位论文3 结果和 Aβ25-35对 BV2 小胶质细胞活力的影响CK-8 法检测 NBP 和 Aβ25-35对 BV2 小胶质细胞生存率的次设为 0 mol/L、10 mol/L、20 mol/L、40 mol/L、60 m是 0 mol/L、10 mol/L、20 mol/L、40 mol/L。研究发 时，细胞活力无明显变化，因此本实验选取 40 mol/L 作图 1a）。Aβ25-35浓度为 10 mol/L 时细胞轻微受损，但不度的增加细胞损伤越来越重，本实验将 20 mol/L 定为细（图 1b）。

图 1b 梯度浓度的 Aβ25-35对 BV2 小胶质细胞存活率的影响*vs 0 mol/L P＜0.05ern Blot 检测 NBP 对 BV2 小胶质细胞自噬相关蛋白显示，与 Model 组相比，NBP 组自噬蛋白 LC3B-Ⅱ表达量量减少，自噬水平上调。给予自噬抑制剂 3-MA 联合处理后LC3B-Ⅱ蛋白水平比 NBP 组明显降低，同时 p62 蛋白水平显有统计学意义（图 2）。

图 1b 梯度浓度的 Aβ25-35对 BV2 小胶质细胞存活率的影响*vs 0 mol/L P＜0.05stern Blot 检测 NBP 对 BV2 小胶质细胞自噬相关蛋白的显示，与 Model 组相比，NBP 组自噬蛋白 LC3B-Ⅱ表达量增量减少，自噬水平上调。给予自噬抑制剂 3-MA 联合处理后检 LC3B-Ⅱ蛋白水平比 NBP 组明显降低，同时 p62 蛋白水平显有统计学意义（图 2）。

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本文编号：2772738