化合物9714对海马和皮质M、N型乙酰胆碱受体各亚基及类神经细胞调节作用的研究

发布时间：2020-08-07 01:33

【摘要】：目的：探索化合物9714对老年痴呆的作用机制，确定其具体的作用靶点，从细胞水平对9714作用的细胞信号转导途径进行研究。方法：首先用东莨菪碱建立老年痴呆的实验模型，分别设立空白对照组、模型对照组、喜得镇组(1.0mg/kg)、尼莫地平组(20mg/kg)、9714小剂量组(15mg/kg)、9714中剂量组(30mg/kg)、9714大剂量组(60mg/kg)七组实验小鼠，用跳台试验和水迷宫试验确定9714对老年痴呆的影响作用；其次分别提取七组实验小鼠的海马及大脑皮质蛋白，用Western-Blotting方法测定M型及N型乙酰胆碱受体蛋白表达情况，确定9714对M、N型乙酰胆碱受体表达的影响；最后，培养SHSY5Y、SK-N-SH、PC12三种类神经细胞，分别用不同浓度的9714、人参皂甙Rgl、Rbl、Re处理，比较9714与人参皂甙的作用效果，确定9714最适作用浓度；提取处理后类神经细胞的蛋白，用Western-Blotting方法测定类神经细胞M型及N型乙酰胆碱受体蛋白表达情况，初步确定9714对类神经细胞SHSY5Y、SK-N-SH、PC12细胞的M、N型乙酰胆碱受体表达的作用。结果：1．化合物9714的15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg三个剂量组均能不同程度地改变东莨菪碱所致记忆获得障碍小鼠的学习记忆能力。在一次性被动回避反应的学习能力测试中，9714大剂量可以缩短反应期、延长潜伏期：在一次性被动回避反应的记忆能力测试中，9714中剂量及大剂量均能明显地延长潜伏期、缩短停留时间、减少错误次数；在水迷宫试验的学习能力测试中，9714的三剂量组均能明显缩短模型小鼠B、C点到达时间、减少错误次数；在水迷宫试验的记忆能力测试中，9714的中剂量组和大剂量组均能明显地缩短B、C两点到达时间、减少错误次数。 2．海马中：M_1受体模型组较空白对照组表达量明显下调，阳性对照药喜得镇组及尼莫地平组M_1受体表达量较模型对照组略升高，9714剂量组M_1受体表达量较模型对照组显著升高，并有显著的剂量相关效应；α4受体阳性对照药喜得镇组及尼莫地平组同9714剂量组蛋白表达量基本相近，且均高于模型对照组； Q7受体表达在模型对照组同空白组相比有明显降低，在喜得镇组同模型对照组比较无明显差异，尼莫地平组和9714组较模型对照组a7受体表达量有提高 (尸很口习，但以9714组对Q7受体表达量提高最为显著，且存在明显剂量效应; 海马中Ap受体表达量在模型组同空白组无明显差异，在各试验组中差别也不明显。皮质中:a4受体含量在喜得镇组及尼莫地平组、9714小剂量组中同模型对照组相比没有明显改变，9714中、大剂量组较模型对照组相比有显著升高 (尸石叹必);a7受体表达量在喜得镇组及尼莫地平组、9714小剂量组中均较模型对照组相比没有差异，9714中、大剂量组较模型对照组相比有显著升高(尸石叹口友、尸0.01);Ml受体表达量在阳性对照药喜得镇组同模型对照组相比没有统计学意义，在尼莫地他、9714小剂量组中均较模型对照组.相比有提高(P0.’如，9714 中、大剂量组中较模型对照组相比有显著升高(尸似01);Ap受体在尼莫地平组、 9714各剂量组中表达量均较模型对照组相比有降低(尸石叹街)，其中在尼莫地平组、9714大剂量组降低更明显(尸石叹01)。- 3.各类神经细胞经9714处理48h后镜下观察，可见组间细胞形态略有改变: 胞体显著增大，突起增粗、延长，形成稠密网络，细胞数量明显增多，细胞透光性增强，细胞活性增强，·且繁殖速度增快。9714组对类神经细胞有效浓度作用强度顺序依次为:80咖4 ouM20咖，且以sK.N一sH细胞对9714最为敏感， sHsYSY、Pc12细胞次之.。一丫. sHsYSY细胞用5%血清培养、9714处理48h后，’同对照组细胞(5%血清培养)比较，9714 10uM、20uM组有显著差异，表现为:’细胞数量明显增加，细胞突起明显增多、增粗、延长，细胞透光性增强，细胞生长、增殖状态良好，抵抗缺血清能力增强。经9714处理的类神经细胞48h后做MTT试验，光吸收值结果显示:9714 处理的·SHSYSY和 SK一SH细胞，与空白对照组相比9714浓度在2，suM，suM、 10咖碑OuM、40uM时光吸收值均有明显升高(尸0.01)，且存在明显剂量效应; 9714浓度在80uM时细胞光吸收值则明显降低(p0.01)，细胞大量死亡。9714 处理的PC 12细胞，与空白对照组相比9714浓度在suM、louM、20uM、40uM、 80uM、100uM时光吸收值均有明显升高，有显著差异(尸0.01)，.且存在明显剂量效应。.一不同剂量的9714处理pC12细胞48h后a4、a7、M;受体Westem一B扣tti飞结果显示:。4、。7、M，受体表达量与空白对照组相比均有明豆提高，并有相关剂量效应。结论:化合物9714小(15mg/kg)、中(3omg/kg)、大(60mg/kg)三个剂量均能不同程度地改变东夏若碱所致记忆获得障碍模型小鼠的学习和记忆能力; 能够显著提高海马和皮质中a4、a7、MI受体的表达，显著下调皮质中Ap受体的表达。化合物9714使SK一SH、SHSYSY、PC12三种类神经细胞胞体显著增大，细胞数量明显增多，突起增粗延长、相互联系紧密;MTT试验结果显示9714 具有显著的细胞保护、促增殖、改善细胞生长状态、提高细胞活性的作用，9714 能够上调PC12细胞a4、a7、M;受体的表达。化合物9714可能通过提
【学位授予单位】：河北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R749.16

【参考文献】