静脉移植人羊膜间充质干细胞在阿尔茨海默病小鼠的体内迁移及治疗机制研究

发布时间：2020-08-08 21:39

【摘要】： 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease AD),俗称老年性痴呆(senile dementia),是一种中枢神经系统原发性退行性变性疾病。发现至今,研究者一直没有停止对阿尔茨海默病的病因和发病机理的研究,但对于这一疾病的治疗至今还没有突破性的进展。随着细胞工程的迅速发展,干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的研究为治疗AD开辟了新天地。人羊膜间充质干细胞(aminiotic membrane derived human mesenchymal stem cells, Ad-hMSCs)是近些年分离培养的多潜能干细胞。本实验深入探索静脉移植人第三代羊膜间充质干细胞在阿尔茨海默氏症转基因鼠体内的迁移存活,以及在脑部的归巢和疾病治疗的机制。本论文共分为三部分。第一部分：人羊膜间充质干细胞的体外分离培养；第二部分：第三代人羊膜间充质干细胞静脉移植在转基因阿尔茨海默症小鼠体内的迁移及存活；第三部分：第三代人羊膜间充质干细胞静脉移植在转基因阿尔茨海默症小鼠脑部的归巢以及疾病治疗机制研究。第一部分：从胎盘分离出人羊膜间充质干细胞,体外培养扩增,传至第三代,选择形态保持良好,生长旺盛的细胞做后续实验。第二部分：采用原代培养后传至第三代的人羊膜间充质干细胞进行转基因阿尔茨海默病小鼠的尾静脉移植,调整细胞浓度为1×106个／ml,注射量0.5 ml/只。采用组织冰冻切片,荧光显微镜观察人羊膜间充质干细胞移植后,不同时间点在转基因阿尔茨海默症小鼠体内心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及脑部的迁移情况。结果发现移植第三代的人羊膜间充质干细胞后,在不同的时间的小鼠的肝脏、脾脏、肺脏及脑组织都可以发现归巢的细胞存活；而任何时间在小鼠的心脏以及肾脏均未能检测到归巢细胞。并且所有实验小鼠生长良好,无明显的体重降低,及其他竖毛、抓狂、癫痫等不良反应。第三部分：第三代人羊膜干细胞静脉移植APP转基因鼠模型后31d,通过免疫组化技术,对第三代的人羊膜间充质干细胞在转基因阿尔茨海默病小鼠的脑组织中的分化功能进行研究,探讨可能的疾病治疗机制。结果发现小鼠脑组织中星形胶质细胞表达明显增多,神经干细胞、神经祖细胞以及神经元细胞也明显增加,并且没有致瘤现象,小鼠肝肾功能正常。表明人羊膜间充质干细胞尾静脉移植对治疗转基因阿尔茨海默病小鼠有积极的治疗效果,安全可行。本研究首次采用人羊膜间充质干细胞以静脉途径移植观察第三代人羊膜干细胞在阿尔茨海默氏症转基因鼠模型体内不同时间点的迁移情况,并研究人羊膜间充质干细胞移植31d后,在小鼠脑组织中的分化以及发挥的生物学功能。本研究结果将为今后的临床实验提供理论基础和直接证据。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R749.16
【图文】：

生长曲线,间充质干细胞,生长曲线,体外分离

第一部分:人羊膜间充质干细胞的体外分离培养代，倒置显微镜下镜检，·选取那些细胞生长状态旺盛(图2)，形态保持较好，梭形明显的细胞(图ir)，胰蛋白酶消化后，离心，洗涤，收集备用。2.结果2.1人羊膜间充质干细胞原代细胞的体外分离采用本课题组〔，·5，体外分离获取人羊膜间充质干细胞的方法，每份胎盘标本可以获取约 (3~7.5)x10e人羊膜间充质干细胞，分3个75ml细胞培养瓶培养(图la)。细胞48h内开始贴壁生长，但分布不均匀(图lb)。图2第三代人羊膜间充质干细胞的生长曲线2.2人羊膜间充质干细胞体外增殖人羊膜间充质干细胞培养8d左右，细胞在培养瓶底不均匀铺满(图1。)

小鼠,心脏,剪口,输液器

镊夹着心尖小心提起，暴露小鼠心脏动脉，用输液器针头小心穿过小鼠心脏，并延伸进入心脏动脉，用手术缝合线扎紧，然后在小鼠心脏上剪口，用含有肝素的生理盐水进行灌注(如图3所示)。灌注结束后，分取各实验鼠脑组织，一20℃避光保存。;对才飞」…君.图3小鼠心脏灌注

间充质干细胞,计量资料,干细胞,脑组织

每张切片选取5个不同视野，采用加量分析，计算阳性区面积百分比。0处理数据，计量资料数据采用x士s表示水准。=0.05质干细胞的Brdu标记鉴定果，可见，移植组小鼠脑组织中大部分细染成棕色或褐色，Brdu呈阳性，表明有B迁移进入小鼠的脑组织中(图5)。

【参考文献】