中枢血管紧张素Ⅱ在淀粉样蛋白生成中的作用研究

发布时间：2020-09-08 17:47

　　背景:阿尔茨海默病(AD)是神经科学领域尚未解决的最大难题之一。最近的研究证明应激及应激激素,包括儿茶酚胺和糖皮质激素,参与了阿尔茨海默病的发病。血管紧张素受体抑制剂对AD模型动物或具备AD危险因素的动物认知功能有很大的改善作用。但是,这种改善作用的机制并未明确。而且,中枢血管紧张素II(Ang II)作为体内的基础应激激素,在AD中的发病作用并未得到直接的研究。本研究集中于中枢Ang II对淀粉样蛋白(Aβ,AD神经病理的关键起动因素)生成的影响,旨在提供此应激激素与AD发病关系的证据。方法与结果:通过微量泵向大鼠(雄性Sprague-Daweley大鼠,280-310g)侧脑室内注射不同浓度的Ang II(低剂量6ng/hr,中剂量60ng/hr,高剂量600ng/hr)来模拟应激时脑内升高的Ang II.经过持续一个星期不间断的注射,我们发现大鼠脑组织α,β,γ分泌酶有不同改变,且Aβ产量有所增高。而用AT1R阻滞剂氯沙坦后会消除上述所有变化,这表明这些变化是Ang II引起的。结论及意义:中枢Ang II是应激反应的必需因素。本研究结果表明应激时升高的中枢Ang II在Aβ生成过程中起着重要作用,而且,针对中枢Ang II进行的应激预防及治疗将成为抗AD的新途径。
【学位单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R749.16
【部分图文】：

标准曲线,说明书,反应条件,公司

图 1：根据 takara 公司说明书制定的 real-time PCR 反应条件.3.3 分析：根据 ΔΔCT 公式法计算各组之间特定基因的相对表达量。.4 组织总蛋白提取.4.1 组织匀浆：取 50 mg 脑组织至 5 mL 匀浆管中，加入 1 mL RIPA 后在冰盒上匀浆 10 sec。后置冰盒上裂解 30 min。.4.2 离心：将上述裂解液转移到 1.5 mL EP 管中，在 12 500 rpm 下离心 10 min。.4.3 组织蛋白浓度测定：取 5 uL 蛋白样品加入到 95 uL 生理盐水中，再加入 3mL 考马斯亮蓝 G250 染液。30 min 内上机检测。根据标准曲线计算各管蛋白样品浓度。.4.4 蛋白变性：在上述各蛋白样品管中加入 1/5 体积 5*蛋白上样缓冲液后，放入 100℃中煮沸 10 min。

抗体,中枢,氨基末端,低剂量

图 4：AT1R(A)、APP(B)、ADAM 10(C)、BACE 1(C)、PS 1(C)的定量 PCR 检测结果2. 中枢 Ang II 刺激可以下调全长 APP 蛋白水平但上调其 mRNA 水平识别 APP 氨基末端片段的抗体通常也能识别全长 APP 整蛋白。在本研究中，我们采用这种抗体来分析全长 APP 的蛋白水平（包括成熟 APP 和成熟前APP）。这种抗体的有效性在最近的研究中得到了证实[38-40]。WB 结果（图 5AC）显示中枢 Ang II 可以引起大鼠脑组织中全长 APP 蛋白水平显著下降：相对于对照组，低剂量组和中剂量组下降了 50%（P<0.01），高剂量组下降了 70%28

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南京医科大学硕士学位论文（P<0.01）。而不同剂量的 Ang II 均可引起大鼠脑组织中的 APP mRNA 水平呈2 倍左右的增长（图 4 B ，P<0.01）。这些效应能被氯沙坦阻断（P>0.05），证实中枢 Ang II 在其中的介导作用。

【共引文献】