PSD-95信号通路在大鼠攻击行为中的作用及机制研究

发布时间：2020-09-15 12:51

　　 目的1.通过构建大鼠不同性质攻击行为模型,探索PSD-95(postsynaptic density-95,PSD-95)阻断剂ZL006对攻击行为的作用,明确PSD-95信号通路在攻击行为中的作用及机制。2.通过验证PSD-95信号通路在五轻色胺1A受体(serotonin 1A receptor,5-HT1AR)激动剂改善大鼠病理性攻击行为过程中的作用,进一步探索PSD-95信号通路在病理性攻击行为中的参与机制。方法1.将54只Sprague-Dawley(SD)大鼠(购于重庆医科大学实验动物中心,生后21天),随机分为3组,分别构建病理性攻击(pathological aggression,PA)模型组(n=18)、普通攻击(normal aggression,NA)模型组(n=18)及正常饲养的对照组(Control,Ctrl)(n=18),并同时饲养入侵鼠(instrumentalrats)(n=18)。建模成功后,利用居住-入侵试验测试大鼠攻击行为。再从三个模型组中各随机选取12只构建成功的大鼠模型,分别随机分为2组:PA+ZL006组(n=6)、PA+生理盐水组(Saline)(n=6)、NA+ZL006 组(n=6)、NA+Saline 组(n=6)、Ctrl+ZL006组(n=6)、Ctrl+Saline 组(n=6)。ZL006 和生理盐水分别按照 1.0 mg/kg和2ml/只腹腔注射。每隔三天注射一次,且每次于18:00进行注射,持续两周后对各组大鼠再次进行居住-入侵实验。行为学检测结束后,将大鼠麻醉迅速取眼眶后静脉血,离心取血清,用ELISA法测大鼠血清糖皮质激素浓度;后将大鼠断头处死,取海马、前额叶、下丘脑组织,用Western blot检测神经元型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,nNOS)、PSD-95、糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的表达。未进行干预的大鼠则在建模后直接麻醉、处死,并检测相关指标(如前述)。2.将另外成功构建的24只病理性攻击大鼠随机分为4组,分别为8-OH-DPAT 组、8-OH-DPAT+ZL006 组、ZL006 组、Saline 组,5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)以1 mg/kg每日腹腔注射并持续两周、PSD-95阻断剂(ZL006)以1mg/kg每隔3天腹腔注射,生理盐水按照2ml/只腹腔注射并持续2周。每日18:00进行注射,ZL006均在8-OH-DPAT注射后10min进行注射。分别在给药前、给药1周后及给药2周后用居住-入侵实验测试大鼠病理性攻击行为,且每次居住-入侵实验后均取大鼠眼眶后静脉血。最后一次行为学检测结束后取大鼠海马、前额叶及下丘脑组织,用Western blot检测各脑区5-HT1AR、PSD-95及GR的表达。结果1行为学结果1.1建模后利用居住-入侵试验检测行为学结果示:PA组攻击总数、攻击持续时间、攻击要害部位次数、屈服后再次攻击次数均高于NA组和Ctrl组(P0.01),且NA组攻击总数及攻击持续时间高于Ctrl组(P0.01)。干预后发现NA+ZL006组攻击总数、攻击持续时间较NA+Saline组显著降低(P0.01),PA+ZL006组攻击潜伏时间较PA+Saline组增加,差异具有显著性统计学意义(P0.01)。1.2给予病理性攻击大鼠不同给药方案,行为学结果发现:8-OH-DPAT组大鼠攻击总数、攻击持续时间及攻击要害部位次数在给药1周及2周后均有明显下降(P0.05);8-OH-DPAT+ZL006组大鼠仅在给药1周后有下降(P0.05);ZL006组的行为学在一周、两周后均无明显变化(P0.05)。2 Western blot检测结果2.1建模成功后,未进行干预的大鼠其相关指标Western blot结果显示:海马区PA组PSD-95、nNOS表达均低于Ctrl组(P0.01),而NA 组 PSD-95、nNOS 表达则高于 Ctrl 组(P0.01,P0.05),PA 组GR表达显著高于NA组、Ctrl组(P0.01);前额叶区NA组nNOS表达低于PA组、Ctrl组(P0.05,P0.01),PA组nNOS表达则低于 Ctrl 组(P0.05),NA 组 PSD-95 表达低于 Ctrl 组(P0.05),PA组GR表达高于NA组和Ctrl组(P0.01,P0.05);下丘脑区PA组nNOS表达高于NA组和Ctrl组(P0.05,P0.01),NA组nNOS表达高于Ctrl组(P0.05),PA组PSD-95表达高于NA组和Ctrl组(P0.05,P0.01)。干预后,仅在海马区发现NA+ZL006组GR表达较NA+NaCl组升高(P0.01),其余各模型ZL006组和Saline组各脑区PSD-95、nNOS、GR表达差异均无统计学意义(P0.05)。2.2给予病理性攻击大鼠不同干预手段后,Western blot结果发现:海马区ZL006组PSD-95低于其余三组(P0.05),而8-OH-DPAT组PSD-95表达则高于其它三组(P0.05),8-OH-DPAT组GR表达低于其余三组(P0.05),8-OH-DPAT 组和 8-0H-DPAT+ZL006 组 5-HT1AR表达均高于其余两组(P0.05);前额叶区8-OH-DPAT组PSD-95表达高于其余三组(P0.05),8-0H-DPAT+ZL006组PSD-95表达高于ZL006 组和 NaCl 组(P0.05),8-OH-DPAT 组和 8-0H-DPAT+ZL006组5-HT1AR表达均高于其余两组(P0.05);下丘脑区则发现各组间PSD-95、5-HT1AR表达差异无统计学意义(P0.05)。3 ELISA测血清糖皮质激素浓度结果3.1建模后,取未进行干预大鼠眼眶后静脉血,测其血清糖皮质激素结果发现:PA组血清糖皮质激素浓度显著低于Ctrl组(7.06±1.64ng/mlvs15.67±1.36ng/ml,P0.01),NA 组清糖皮质激素浓度则高于 Ctrl 组(23.04±4.83ng/mlvs15.67±1.36ng/ml,P0.05)。干预后比较各模型组ZL006和Saline组血清糖皮质激素浓度发现,NA+ZL006组血清糖皮质激素浓度低于NA+Saline组(16.98±1.88 ng/ml vs 24.42±1.77 ng/ml,P0.01)。3.2对病理性攻击大鼠给予不同干预方案后,测血清糖皮质激素浓度发现:8-OH-DPAT组在给药一周后血清糖皮质激素较给药前增加(16.33±6.71 ng/ml vs8.72±3.34 ng/ml,P0.05),且给药两周后血清糖皮质激素浓度较给药一周后继续增加(19.21±4.05 ng/ml vs 16.33±6.71ng/ml,P0.05)。其它三组给药后糖皮质激素浓度则无明显变化(P0.05)。结论1.ZL006可改善普通攻击大鼠模型的攻击行为,而同等剂量下的ZL006对病理性攻击大鼠的攻击行为无明显改善作用。这可能与不同攻击模型海马区GR的表达和血清糖皮质激素浓度的水平差异有关。2.PSD-95信号通路是5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)对病理性攻击行为改善作用的重要途径,可能原因是PSD-95信号途径介导了8-OH-DPAT对病理性攻击大鼠海马区GR和血清糖皮质激素的调控作用。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R749
【部分图文】：

ＥＬＩＳＡ检测结果：干预后ＮＡ＋ＺＬ００６组大鼠血清糖皮质激素浓度低于逡逑ＮＡ＋Ｓａｌｉｎｅ组，差异具有统计学意义（ＰＣ０．０１），其余各模型实验组与盐水组间无逡逑统计学差异（尸＞０．０５）（见图７）。逡逑Ｃ邋３０－１逦，邋＊＊邋，逡逑＾逦Ｉ逦１逡逑８逦Ｔ逡逑Ｉ逦丁逡逑ｉｔ邋ｉ邋ｎ逡逑ｉｉ逡逑Ｉ邋ｓ邋１０邋－邋Ｔ逡逑§逡逑ｃ逦｜逡逑Ｏ逡逑Ｖ邋＂ｖｗ逡逑图７干预后各组大鼠血清糖皮质激素浓度逡逑Ｆｉｇ７邋Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ邋ｉｎ邋ｓｅｒｕｍ邋ａｆｔｅｒ邋ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ逡逑＊邋Ｐ＜０．０５，邋＊＊Ｐ＜０．０１邋ｖｓ邋Ｓａｌｉｎｅ邋ｇｒｏｕｐ．邋ｎ＝６，邋ｘ邋土邋ｓ逡逑２８逡逑

【参考文献】

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本文编号：2818984