神经干细胞联合多种细胞因子及纤维蛋白支架材料改善阿尔兹海默病小鼠认知记忆障碍研究

发布时间：2020-10-21 10:43

　　 阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)是世界范围内影响老年人健康的第一大神经退行性疾病。AD发病是由于大量Aβ沉积和Tau蛋白磷酸化引起大脑多区域神经细胞凋亡,最终导致患者出现了严重的认知和记忆障碍等症状。本研究通过神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)联合多种营养因子和纤维蛋白支架材料移植阿尔兹海默病模型小鼠双侧海马区,探讨细胞移植对小鼠模型的记忆认知功能影响及NSCs移植后迁移定位和分化能力。从10d龄的C57BL/6J孕鼠分离获得胎鼠NSCs,将NSCs体外分化及鉴定后移植到小鼠AD模型。实验将AD模型小鼠随机分3组:PBS(对照组),多种细胞因子组,NSCs+多种细胞因子组。作用一定时间后,利用Morris水迷宫及新物体识别实验分析移植NSCs前后AD鼠的记忆认知改善情况;最后通过免疫荧光,免疫组化和Western-blotting检测移植的NSCs在宿主脑内向神经元和胆碱能神经元分化及迁移的能力。分离的海马区神经干细胞在体外可以正常增殖,并且分离的NSCs经过14 d的体外诱导培养后,免疫荧光染色结果显示分化成具有胆碱能神经元标志物Ch AT的神经细胞。Morris水迷宫实验检测发现,NSCs+多种细胞因子组小鼠找到平台前的逃避潜伏期时间14.12±7.45 s,要明显低于PBS组39.65±4.64 s,(F=2.578,P=0.0094);多种细胞因子组的时间15.68±5.34 s同样低于PBS组39.65±4.64 s,(F=1.324,P=0.0016);24h后撤去平台,NSCs+多种细胞因子组逃避潜伏期时间15.12±3.52 s仍低于PBS组37.17±2.18 s,(F=2.598,P=0.0003);因子组时间16.62±3.23 s同样低于PBS组37.17±2.18 s,(F=2.186,P=0.0004);新物体识别实验中,各实验组对新物体探究时间占总探究时间百分比结果中,NSCs+多种细胞因子组数据68.46±2.4%要高于PBS组结果54.47±4.79%,(F=3.983,P=0.018),因子组65.20±1.03%同样高于PBS组54.47±4.79%,(F=21.63,P=0.042);本研究采用Graph Pad Prism7.0软件进行统计学分析,组间比较采用成组F检验方法。发现NSCs+多种细胞因子组、多种细胞因子组的AD模型鼠记忆认知状况在移植后的一段时间内均得到改善,随着时间的增长,NSCs+多种细胞因子组的记忆改善情况相较多种细胞因子组持续时间更长久;Western-blotting结果显示AD模型鼠海马区胆碱能神经元与正常C57BL/6J鼠相比表达减少,而移植NSCs后的AD模型鼠脑内胆碱能神经元增多;免疫荧光与免疫组化结果显示,移植的NSCs在脑内移植区存活,并向胆碱能神经元分化。本研究中神经干细胞联合多种细胞因子及纤维蛋白支架材料共同移植到AD模型鼠后,能够在脑内分化为胆碱能神经元,改善AD小鼠的记忆认知功能。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R749.16

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本文编号：2850022