miR-181b对阿尔茨海默病细胞模型自噬的影响

发布时间：2020-11-13 07:03

　　 目的:阿尔茨海默病(AD)是痴呆最常见的原因。神经细胞外β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ1-42)异常聚集形成的老年斑是AD的病理学标志。自噬是真核细胞中广泛存在的降解/再循环系统。生理条件下自噬对维持细胞稳态发挥重要作用。自噬功能的异常会导致变性蛋白和损伤细胞器的积累。在发病早期的AD患者脑内,发现大量自噬体的存在。自噬体-溶酶体系统也是近年来研究Aβ沉积的新方向。自噬的调控机制非常复杂,参与到自噬中的信号通路数量繁杂,相关研究表明,微小RNA通过调控自噬相关基因的表达,从而发挥对自噬进行调节作用。近年来众多研究显示微小RNA(MiRNAs)与AD的发生、发展密切相关。其中miR-181b在正常人脑脊液及血清中十分丰富而在AD患者中显著下降。已证实miR-181b促进神经细胞突触囊泡发育及促进其生长并能抑制和延缓突出囊泡的受损。这些研究表明miR-181与AD等神经系统疾病存在相关性,而miR-181b对AD细胞模型自噬的调节及其作用机制的信息很少。在此基础上,我们构建AD细胞模型,探讨miR-181b对AD细胞自噬的影响及其作用机制,可能为AD的预防和治疗提供新的靶标和方向。研究对象和方法:本研究应用PC12细胞(大鼠嗜铬神经瘤细胞)及Aβ25-35制备AD细胞模型,采用MTT法检测PC12细胞活性,检测加入Aβ25-35处理的细胞中透射电镜观察自噬体的数量、Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-II蛋白的表达水平和P70S6K,AKT及其磷酸化的蛋白在细胞中的表达变化。通过实时荧光定量PCR确定miR-181b的表达量,进一步通过转染miR-181b mimic/inhibitor后,检测miR-181b对Aβ25-35处理的PC12自噬的影响。结果:本实验结果显示在Aβ25-35处理的PC12细胞中,细胞存活率下降。同时,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达上调,透射电镜下观察到自噬体的数目增多、miR-181b表达水平下调。转染miR-181b mimic上调miR-181b可以保护PC12细胞免受Aβ25-35诱导的细胞毒性,提高细胞存活率,抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞自噬。上调细胞内miR-181b水平后,与Aβ25-35组相比,p-AKT、p-mTOR、p-P70s6k蛋白水平明显提高,而转染miR-181b inhibitor后结果与之相反。结论:Aβ25-35可诱导PC12细胞自噬,在AD细胞模型中miR-181b表达下调明。在Aβ25-35处理的PC12细胞中过表达miR-181b抑制细胞自噬。MiR-181b可能以mTOR依赖的方式参与了Aβ25-35诱导的自噬的调控。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R749.16
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
材料和方法
    1 材料试剂及主要仪器设备
        1.1 细胞来源
        1.2 试剂及耗材
        1.3 实验仪器
        1.4 常用实验试剂配置
        1.5 细胞培养方法及步骤
    2 细胞接种、转染及分组
        2.1 实验试剂
        2.2 实验器材
        2.3 常用液体配置
        2.4 细胞接种、转染miR-181b及分组
    3 透射电镜
        3.1 实验试剂
        3.2 操作步骤
    4 MTT法检测细胞活力
        4.1 实验试剂
        4.2 实验仪器
        4.3 操作步骤
    5 实时定量PCR检测miR-181b的水平
        5.1 实验试剂
        5.2 实验仪器
        5.3 PCR引物
        5.4 操作步骤
    6 Western blot法检测AKT /p-AKT、p-P70S6K/P70S6K蛋白的水平
        6.1 实验试剂
        6.2 实验仪器
        6.3 抗体
        6.4 常用溶液配置
        6.5 蛋白提取和定量检测
    7 统计学处理
结果
    1 Aβ25–35 处理的PC12细胞存活率下降
    2 Aβ25–35 处理的PC12细胞自噬增强
    3 Aβ25-35 处理的PC12细胞中Mi R-181b表达下调
    4 miR-181b对Aβ25-35 处理的PC12自噬的影响
    5 miR-181b可能是以m TOR依赖的方式调控Aβ25-35 诱导的自噬过程
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘巧云;沈汉明;夏大静;;锌与自噬[J];浙江大学学报(医学版);2016年03期

2 李迪;李艳;;自噬启动与调控机制的研究进展[J];武汉大学学报(医学版);2018年05期

3 韩苏夏;蔡梦娇;;自噬在肿瘤治疗策略中的角色[J];西部医学;2018年09期

4 周岐鸣;刘洋;季光;宋海燕;;调节自噬改善非酒精性脂肪性肝病的药物研究进展[J];中华中医药学刊;2018年10期

5 李晓琼;何玲玲;李新毅;;自噬与中枢神经系统退行性疾病研究进展[J];中风与神经疾病杂志;2018年10期

6 马文科;戴舒惠;罗鹏;杨悦凡;费舟;;线粒体自噬的研究进展[J];现代生物医学进展;2017年06期

7 付婉;董笛;赵颖;;自噬的相关分子机制[J];中国生物化学与分子生物学报;2017年05期

8 方聪聪;毛善平;董慧敏;刘宝辉;王舜;;线粒体自噬与中枢神经系统疾病关系的研究进展[J];卒中与神经疾病;2017年02期

9 李旭卉;吴习习;张凯;罗海霞;李敏;;线粒体自噬与癌症关系的研究进展[J];动物医学进展;2017年09期

10 马佳丽;侯静波;;巨噬细胞自噬在动脉粥样硬化中的研究进展[J];实用药物与临床;2017年08期

相关博士学位论文 前10条

1 于织波;TRIM22通过自噬调控RSV复制的研究[D];河北医科大学;2018年

2 王玉;番茄生长发育和逆境响应中自噬的作用及其调控机制[D];浙江大学;2017年

3 孙晓琪;雌二醇通过G蛋白偶联雌激素受体30 (GPR30)/ERK1/2信号通路调节MC3T3-E1细胞线粒体自噬的分子机制研究[D];中国医科大学;2018年

4 刘永一;自噬在棕榈酸诱导骨髓间充质干细胞凋亡中的作用及机制研究[D];中国医科大学;2018年

5 陈曦;丙泊酚对小鼠成肌细胞自噬的影响及其机制的研究[D];吉林大学;2018年

6 张丹;自噬在新生大鼠支气管肺发育不良中的作用及调控机制研究[D];中国医科大学;2018年

7 孟春芹;竹节香附素A调控PI3K/AKT/mTOR诱导肠癌细胞自噬和凋亡的研究[D];南京中医药大学;2018年

8 牛国辉;HIF-1α调节自噬在缺氧缺血性脑损伤中的作用机制研究[D];郑州大学;2018年

9 王红娟;远隔缺血处理激活自噬对血管认知功能障碍保护机制研究[D];山东大学;2018年

10 陈树东;慢性颈脊髄压迫的临床转归及自噬在脊髄运动神经元中的作用[D];广州中医药大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 谢巍伟;BRF1通过自噬和MAPK/ERK信号通路调控炎症的实验研究[D];重庆医科大学;2018年

2 邓文珍;TXNIP通过介导自噬紊乱促进胰岛β细胞功能障碍的机制研究[D];重庆医科大学;2018年

3 郑维;ATG5联合ATG7通过PERK信号通路调控自噬、ERS及D-EAK短肽对小鼠骨关节炎的效应研究[D];重庆医科大学;2018年

4 刘醒然;自由转轮运动通过miR-130a介导自噬延缓大鼠脑衰老的机制研究[D];武汉体育学院;2018年

5 刘一锋;FBP1通过抑制线粒体自噬促进乳腺癌细胞凋亡及其机制研究[D];重庆医科大学;2018年

6 李旭;IFN-λ1下调自噬因子ATG5和GABARAP表达抑制HCV复制的机制研究[D];广西医科大学;2017年

7 文巧林;锰诱导SH-SY5Y细胞发生线粒体自噬及BNIP3调控作用的初步研究[D];广西医科大学;2017年

8 蒋梦彤;胰腺癌自噬相关非编码RNA及其互作机制的初步探讨[D];广西医科大学;2017年

9 李景峰;昆虫自噬途径与杆状病毒AcMNPV侵染关系初探[D];西北农林科技大学;2018年

10 龙隆;淫羊藿次苷Ⅱ抗脑缺血再灌注损伤的作用及其机制研究[D];遵义医学院;2018年

本文编号：2881892