神经保护短肽体内分泌表达策略和治疗作用的研究

发布时间：2020-12-04 12:13

　　近年来人们发现了许多神经保护短肽具有很强的神经保护作用,而且它们的分子量小,能够自由通过血脑屏障,在AD等中枢神经系统疾病的治疗中具有广阔的前景。然而神经保护短肽在临床应用中普遍存在着半衰期短,人工合成的价格昂贵等问题。为了能将神经短肽用于中枢神经系统疾病的治疗,本研究构建了携带融合基因NT4-NAP的慢病毒载体,实现了神经保护短肽NAP在体内的持续分泌表达,通过体外细胞学实验和闭合性脑损伤动物模型证实了可分泌表达NAP的重组慢病毒具有较强的神经保护作用。为了实现重组慢病毒能在体内持续分泌表达的目的和证实其神经保护作用,本研究进行了以下实验:1、构建分泌表达NAP的重组慢病毒采用PCR方法,克隆了融合基因NT4-NAP cDNA,应用重组病毒包装技术构建了可分泌表达神经保护肽NAP的重组慢病毒。2、建立APPsw转基因细胞模型利用逆转录病毒载体,在神经母细胞瘤细胞内表达突变β淀粉样肽前体蛋白APPsw基因。3、通过体内外实验验证可分泌表达NAP的重组慢病毒的神经保护作用①选用构建的AD细胞模型,体外感染重组慢病毒rLent/NT4-NAP,通过RT-PCR检测NT4-NAP基因在细胞内... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：127 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

VIP刺激胶质细胞分泌神经营养物质3．NAP

该外壳蛋白与细胞表面受体的识别决定了病毒颗粒可转导细胞且这些外壳蛋白就是根据相对应的细胞表面受体进行分类的[61]。逆转录病毒生活周期的第一阶段是病毒整合入细胞基因组，导致前的建立。逆转录病毒生活周期的第二阶段是新病毒颗粒的装配和释毒的结构基因编码合成病毒蛋白，与转录出的病毒基因组 RNA 装的病毒颗粒，在细胞的表面以出芽方式释放。（见图 1-2）

多克隆位点、目的基因、选择标志基因取代，仅保留 LTR 及病毒包装信 序列。2）组建包装细胞系。对于病毒颗粒构建、识别等过程所必须的 gag、 env 基因整合在包装细胞的基因组内。3）重组逆转录病毒的包装、收集。将含有目的基因的重组逆转录病毒转染包装细胞获得可用于转导的重组逆转录病毒颗粒，用抗性标记筛选稳定的细胞株。（见图 1-3）4）转导细胞，进行蛋白表达。用所得缺陷型重组病毒感染靶细胞，随病毒 DNA 的整合，目的基因也整合到靶细胞基因组中并进行表达，完因转移。

【参考文献】：
期刊论文
[1]神经营养因子与血脑屏障的研究进展[J]. 徐巳奕,包映晖,江基尧.  中华神经医学杂志. 2005(01)
[2]NT4-NAP融合基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达[J]. 杨宇,吴江,杨欣,胡林森.  中华神经科杂志. 2004(03)
[3]NT4-ADNF-9融合基因原核表达载体的构建[J]. 郑国玺,杨宇,朱宏亮,王全颖,杨广笑.  西安交通大学学报(医学版). 2003(05)
[4]血脑屏障及药物通过血脑屏障方法研究进展[J]. 赵志刚,龚凌志.  中国药学杂志. 2000(04)
[5]神经营养素家族[J]. 余云开,华仲慰,李玉书.  国外医学(分子生物学分册). 1995(03)



本文编号：2897590