miRNA-451/MIF通路介导神经血管单元损伤在帕金森病认知功能障碍中作用及机制研究

发布时间：2021-02-18 11:43

　　目的:本研究旨在探讨mi RNA-451/MIF及其下游信号通路在血脑屏障损伤、神经炎症激活及神经元损伤中对帕金森病认知障碍的影响,阐明其通过神经血管单元在帕金森病认知功能障碍中的作用与机制。方法:采用Mpp⁺诱导MN9D细胞构建细胞帕金森病模型及MPTP诱导小鼠构建动物帕金森病模型,并采用Morris水迷宫测试评估动物认知功能,根据认知功能障碍程度进行分组,分为NC组、Control组、MPTP组-1、MPTP组-2。采用荧光定量PCR测定mi RNA-451的表达水平,探究mi RNA-451与帕金森病认知功能障碍的相关性,并通过免疫组化技术测定多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶（Tyrosine Hydroxylase,TH）损伤。采用慢病毒转染MN9D细胞,在细胞中过表达及沉默mi RNA-451后,采用Mpp⁺诱导帕金森病模型,使用Western Blot测定mi RNA-451/MIF表达水平改变后MIF蛋白和TH的表达水平。采用MPTP腹腔注射和侧脑室立体定向注射mi RNA-451 antagomir及mi RNA-451 antag... 

【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

小鼠黑质多巴胺能神经元受损情况

第二章miRNA-451在MPTP/Mpp+诱导的帕金森病模型中的变化31图1.2平均潜伏期变化曲线，注射MPTP组比未注射MPTP组曲线变化较为平缓。**P<0.01vsNCgroup,#P<0.01vsControlgroup,P<0.01vsMPTP-2group。图1.3水迷宫实验结果柱状图图A表示Morris水迷宫测试各组小鼠空间学习记忆能力的比较。**P<0.01vsNCgroup。图B表示各组小鼠在水迷宫测试时的最大游泳速度，各组游泳速度无统计学差异。图C表示腹腔注射MPTP后各组小鼠的第三天的潜伏期的对比；**P<0.01vsNCgroup,****P<0.0001vsNCgroup，#P<0.01vsMPTP-23.1.4miRNA-451在MPTP诱导帕金森病小鼠与认知障碍的相关性

第二章miRNA-451在MPTP/Mpp+诱导的帕金森病模型中的变化33图1.5TH免疫荧光。由免疫荧光结果可见，本实验使用的MN9D的TH免疫荧光阳性，确实是小鼠种属的多巴胺能神经元细胞。（右下角标尺：75μm）除了在研究帕金森病动物模型的miRNA-451水平的变化，我们还探讨了细胞帕金森病模型(MN9D细胞在MPP+处理下)miRNA-451的表达情况。MPTP不能直接被MN9D细胞摄取，在体内注射MPTP后，MPTP透过血脑屏障，再由神经胶质细胞处理，转化为MPP+，再于大脑内进行相关的病理生理反应，是MPTP活性成分。因此，帕金森病细胞模型常用MPP+处理。相比于正常组，MN9D细胞被MPP+处理24小时后，miRNA-451的表达水平显著上升。结果如图1-3所示。以U6基因作为内参，将正常组MN9D细胞的miRNA-451校正为1，相比于正常组，MN9DMPP+组miRNA-451表达水平显著增加。图1.6表示MN9D正常细胞与经Mpp+处理后的miRNA451水平，****P<0.001。


本文编号：3039511