PCSK9/LRP1介导Ox-LDL促神经细胞凋亡作用与机制研究

发布时间：2021-03-15 18:37

　　阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）是一种多因素引起的,与年龄高度相关,以进行性认知障碍和记忆力损伤为主的中枢神经系统退行性疾病,是最常见的痴呆类型之一。老龄人口中65岁后约13%,85岁后约45%的人患有AD。AD特征性病理改变包括:（1）由39-43个氨基酸组成的β淀粉样蛋白（amyloidβpeptide,Aβ）沉积形成的神经细胞外老年斑（senile plaque,SP）;（2）tau蛋白过度磷酸化形成的神经细胞内神经原纤维缠结（neurofibrillary tangles,NFT）;（3）神经元丢失伴胶质细胞增生。神经细胞凋亡是其主要病理基础之一。高脂血症是AD等神经退行性疾病发生的高危因素,但是高脂血症与神经退行性疾病发生的机制并未完全阐明。本课题旨在研究脂质对神经细胞凋亡的影响及其机制,进而探索高脂血症导致AD等神经退行性疾病发生的机制。第一部分:Ox-LDL对PC12细胞脂质蓄积、凋亡和分泌Aβ的影响以及对PC12细胞中SREBP2、PCSK9及LRP1表达的影响。目的:观察Ox-LDL能否通过调节SREBP2,PCSK9,LRP1表达影响PC... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要英文缩略词索引
第1章 绪论
第2章 实验材料
    2.1 细胞和主要试剂
    2.2 主要仪器设备
第3章 实验方法
    3.1 细胞培养
        3.1.1 细胞复苏
        3.1.2 细胞传代
        3.1.3 细胞换液
        3.1.4 细胞冻存
        3.1.5 实验分组
    3.2 常用液体的配制
    3.3 油红O染色
    3.4 Hoechest33258染色
    3.5 AnnexinV-FITC/PI双染
    3.6 Western blot
        3.6.1 贴壁细胞蛋白质提取
        3.6.2 SDS-PAGE凝胶配制
        3.6.3 电泳
        3.6.4 转膜（湿转膜法）
        3.6.5 封闭
        3.6.6 一抗孵育
        3.6.7 二抗孵育
        3.6.8 ECL化学发光检测
    3.7 siRNA转染
    3.8 ELISA检测Aβ40及Aβ42含量
    3.9 统计分析
第4章 实验结果
    4.1 Ox-LDL增加PC12细胞内脂质蓄积
    4.2 Ox-LDL促进PC12细胞的凋亡
        4.2.1 Hoechst33258染色观察不同浓度Ox-LDL对PC12细胞凋亡的影响
        4.2.2 流式细胞计数检测不同浓度的Ox-LDL对PC12细胞凋亡的影响
    4.3 Ox-LDL增加PC12细胞中SREBP2和PCSK9表达减少LRP1表达
        4.3.1 不同浓度的Ox-LDL对PC12细胞中SREBP2，PCSK9及LRP1表达的影响
        4.3.2 75mg/L Ox-LDL处理PC12细胞不同时间对其SREBP2，PCSK9及LRP1表达的影响
    4.4 Ox-LDL减少PC12细胞Aβ的分泌
    4.5 PCSK9 siRNA转染的结果鉴定
    4.6 PCSK9 siRNA部分抑制Ox-LDL诱导的PC12细胞凋亡
        4.6.1 Hoechst33258染色观察PCSK9 siRNA对Ox-LDL诱导的PC12细胞凋亡的影响
        4.6.2 流式细胞计数检测PCSK9 siRNA对Ox-LDL诱导的PC12细胞凋亡的影响
    4.7 PCSK9 siRNA部分抑制Ox-LDL诱导的PC12细胞中PCSK9表达增加和LRP1表达减少
    4.8 PCSK9 siRNA对PC12细胞中PI3K，Akt，P-PI3K及P-Akt表达的影响
    4.9 PCSK9 siRNA对PC12细胞中NF-κB，Caspase3，Caspase9，Bax及Bcl-2 表达的影响
    4.10 PCSK9 siRNA增加Ox-LDL处理的PC12细胞分泌的Aβ
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
文献综述
    References
攻读学位期间的科研成果
课题资助
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Targeting the PI3K/Akt signaling pathway in gastric carcinoma: A reality for personalized medicine?[J]. Shikha Satendra Singh,Wei Ney Yap,Frank Arfuso,Shreya Kar,Chao Wang,Wanpei Cai,Arunasalam M Dharmarajan,Gautam Sethi,Alan Prem Kumar.  World Journal of Gastroenterology. 2015(43)
[2]Ox-LDL对急性冠脉综合症患者外周血单核-巨噬细胞SREBP-2和HMGCR mRNA表达的影响[J]. 张培东,刘映峰,郭阳,缪绯,余志国,王世祥.  南方医科大学学报. 2009(05)
[3]阿尔茨海默病淀粉样β蛋白诱导神经元凋亡的研究进展[J]. 吕良,钟振国.  中西医结合心脑血管病杂志. 2007(06)
[4]针刺对阿尔茨海默病模型大鼠神经细胞凋亡的影响[J]. 姜桂美,贾超,赖新生.  上海针灸杂志. 2006(12)

硕士论文
[1]PCSK9介导脂质对海马神经元及PC12细胞凋亡的影响及机制研究[D]. 吴琪.南华大学 2014



本文编号：3084627