1. 用含有Cre重组酶的腺苷病毒载体来敲除成熟小鼠脑中腺苷Al受体及N-甲基D-天门冬氨酸（NMDA）受体的局部基因来

发布时间：2021-05-07 07:44

　　用含有Cre重组酶的腺苷病毒载体来敲除成熟小鼠脑中腺苷A1受体及N-甲基D-天门冬氨酸受体的局部基因来研究腺苷在觉醒／睡眠转化中的作用 在现代社会中，人类失眠非常常见，失眠可导致严重认知功能障碍，影响日常工作，此外，已开始重视慢性睡眠剥夺而致的压力。研究从觉醒到睡眠的正常生理转化机制是研究失眠的基础。 腺苷在正常的生理功能中起到多种多样作用，包括促进和维持睡眠。在胆碱能觉醒中枢中，细胞外腺苷的增加会促进由觉醒向睡眠转化。腺苷是通过激活突触前膜和突触后膜腺苷A1受体而起抑制性作用，所以腺苷A1受体在促进睡眠中起重要作用。维持生理性觉醒，需要大脑脚被盖背侧核的神经元为脑干及间脑提供胆碱能递质。应用腺苷至大脑脚被盖背侧核，在活体中可增加睡眠，在实验室中可通过激活突触后膜腺苷A1受体抑制大脑脚被盖背侧核的神经元的活性。 此外，离子性谷氨酸受体的激活可导致皮层神经元释放腺苷，谷氨酸或NMDA可使NMDA受体低水平激活而导致足够量的腺苷释放，可在海马起到暂时性腺苷依赖性的突触抑制作用。已观察到通过腺苷突触前的抑制作用可抑制大脑脚被盖背侧核NMDA受体依赖的反应以及谷氨酸突触活性，... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：164 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
1.全文中文摘要
    (1) 用含有Cre重组酶的腺苷病毒载体来敲除成熟小鼠脑中腺苷A1受体及N-甲基D-天门冬氨酸(NMDA)受体的局部基因来研究腺苷在觉醒／睡眠转化中的作用
    (2) 5-羟色胺转运蛋白的表达与“获得性无助”(抑郁症的动物模型)的关系
2.全文英文摘要
    (1) Focal gene deletion in the brain(knockout of the adenosine A1 receptor and N-Methyl-D-A spartate receptor(NMDAR)in adult mice using adeno-associated viral vector)to study the role of adenosine in wake/sleep transition
    (2) The corelation between serotonin transporter expression and learned helplessness(animal model of depression)
3.综述一(英文)：腺苷、腺苷受体、NMDA受体及觉醒／睡眠转化
    (1) 腺苷受体
    (2) 腺苷受体的转导机制
    (3) 腺苷及腺苷受体对睡眠和觉醒的调节作用
    (4) 谷氨酸受体
    (5) 腺苷受体及NMDA受体的相互作用
    (6) 参考文献
4.综述二(英文)：基因敲除
    (1) 转基因鼠中的Cre／loxP重组系统
        a.条件性基因去处
        b.基因的激活
    (2) 限定在特定区域及特定细胞的基因敲除
    (3) 腺苷有关病毒可有效地介导大脑条件性基因修饰
    (4) 可报告Cre介导重组的报告鼠系
    (5) 参考文献
5.论文一的详细实验步骤(英文)
    (1) 从鼠尾中提取基因组DNA
    (2) 用PCR技术作基因检测
        a.腺苷A1受体转基因敲除鼠系的基因检测
        b.NMDA受体转基因敲除鼠系的基因检测
        c.Z／EG双报告转基因鼠系的基因检测
        d.Nestin-Cre转基因鼠系的基因检测
    (3) 质粒的转化(腺苷A1受体的质粒及NMDA受体质粒)
    (4) 质粒的提取(腺苷A1受体的质粒及NMDA受体质粒)
    (5) ~(35)S-UTP同位素标记核糖探针的制备(腺苷A1受体mRNA及NMDA受体mRNA有意义及反意义链探针)
    (6) 同位素标记核糖探针的原位杂交
    (7) 用地高辛精标记核糖探针的荧光原位杂交
    (8) PicoGreen对比染色
    (9) 转基因鼠的LacZ染色
    (10) 鼠脑的抗绿色荧光蛋白的免疫组化染色
6.论文一(英文)用含有Cre重组酶的腺苷病毒载体来敲除成熟小鼠脑中腺苷A1受体及NMDA受体的局部基因来研究腺苷在觉醒／睡眠转化中的作用
    (1) 引言
    (2) 实验目的
    (3) 材料和方法
    (4) 结果
    (5) 讨论
    (6) 总结
    (7) 参考文献
    (8) 图片
7.综述三(英文)：抑郁、压力、5-羟色胺系统及抗抑郁治疗
    (1) “获得性无助”是已公认的抑郁症的动物模型
    (2) 5-羟色胺系统
        a.含有5-羟色胺细胞的定位
        b.5-羟色胺的生理合成及代谢
        c.5-羟色胺受体
            信号传导途径
            5-羟色胺A1受体与压力
        d.色氨酸羟化酶
        e.5-羟色胺转运蛋白
    (3) 抗抑郁治疗
    (4) 参考文献
8.论文二的详细实验步骤(英文)
    (1) 质粒的转化(5-羟色胺转运蛋白质粒)
    (2) 质粒的提取(5-羟色胺转运蛋白质粒)
    (3) ~(35)S-UTP同位素标记核糖探针的制备(5-羟色胺转运蛋白mRNA有意义及反意义链探针)
    (4) 同位素标记核糖探针的原位杂交
    (5) 结晶紫染色
9.论文二(英文)5-羟色胺转运蛋白的表达与“获得性无助”(抑郁症的动物模型)的关系
    (1) 引言
    (2) 材料和方法
    (3) 结果
    (4) 讨论
    (5) 参考文献
    (6) 图片
10.致谢



本文编号：3173022