MG53蛋白延缓hUC-MSCs衰老及其联合hUC-MSCs移植对阿尔茨海默鼠的神经保护作用
发布时间：2021-06-28 16:39
衰老（senescence）是机体的细胞、组织与器官在结构和功能上出现的不可逆退化和生理功能丧失,最终导致衰老相关疾病的发生。阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）是一种常见的年龄相关的神经退行性疾病,严重影响人类健康。脐带间充质干细胞（human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,h UC-MSCs）具有自我更新和多向分化的潜能,能够修复受损组织,为AD等神经退行性疾病的治疗带来希望。但是,随着传代次数的增加,体外培养的h UC-MSCs逐渐呈现衰老细胞特征,表现为增殖分化能力变弱、干性降低,严重影响其治疗效果。因此,无论是在体内还是体外提高干细胞活性并延缓干细胞衰老是增强干细胞疗效的关键。MG53蛋白（Mitsugumin53 protein,MG53）是TRIM（Tripartite motif,TRIM）家族蛋白的一位成员,在细胞和组织损伤修复中发挥重要的作用。研究表明人源重组的MG53蛋白（Recombinant human MG53 protein,rh MG53）可以保护骨髓间充质干细胞抵抗低...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MG53对hUC-MSCs增殖和迁移的影响
第一部分：MG53蛋白在体外和体内延缓hUC-MSCs的衰老16图1.2MG53对hUC-MSCs周期和凋亡的影响A：流式检测细胞周期；B：周期统计图；C：AnnexinV/PI染色检测细胞凋亡；D：凋亡细胞统计图。*：与P5相比，P<0.05；#：与P10相比，P<0.05；：与P15相比，P<0.05。1.2.3MG53蛋白延缓hUC-MSCs的衰老前期研究表明MG53可以促进hUC-MSCs的增殖和迁移，并抑制凋亡。接下来我们重点观察MG53预处理对干细胞衰老的影响。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)的表达是细胞衰老的标志物。我们发现随着hUC-MSCs传代次数的增加，P10和P15hUC-MSCs的SA-β-Gal阳性细胞数显著增加（P<0.05），而MG53处理之后SA-β-Gal阳性细胞数明显减少（P<0.05，图1.3A和B）。此外，衰老细胞还表现为细胞形态变化和广泛的染色质重构，最显著的是衰老相关异染色质簇集(SAHF)的形成。DAPI染色后激光共聚焦显微镜观察，结果发现与P5代的hUC-MSCs相比，P10和P15hUC-MSCs胞体增大并呈扁平形状、细胞核面积明显变大且核内异染色质聚集程度增加；与相应的未处理组相比，MG53处理能够减小细胞核面积变大并减轻SAHF的形成（图1.3C-F，P<0.05）。核纤层蛋白B1(LaminB1)是可以维持细胞核骨架的完整性进而影响染色质分布参与
第一部分：MG53蛋白在体外和体内延缓hUC-MSCs的衰老19图1.4MG53对衰老细胞中衰老相关基因及SASP表达的影响A：Westernblot检测MG53蛋白在衰老干细胞中的表达；B：Westernblot检测各组衰老细胞中衰老相关基因P16、P21、P53、pCNA、Sirt1的表达；C：衰老相关基因P16、P21、P53、pCNA、Sirt1的灰度分析；D：qRT-PCR检测各组衰老细胞中衰老相关基因P16、P21、P53、Sirt1；E：qRT-PCR检测各组衰老细胞中炎症相关基因TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β的表达；F：炎症芯片检测各组细胞炎症因子释放的变化。*：与P5相比P<0.05；，#：与P15相比P<0.05。1.2.5MG53降低衰老hUC-MSCs中氧化应激水平我们进一步检测MG53对衰老的hUC-MSCs中氧化应激各个指标的影响。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cellular senescence: from anti-cancer weapon to anti-aging target[J]. Lifeng Yuan,Peter B.Alexander,Xiao-Fan Wang. Science China（Life Sciences）. 2020(03)
硕士论文
[1]SA/Col/SDF-1水凝胶负载BMSCs对脑损伤大鼠的神经修复作用[D]. 周建康.郑州大学 2019
[2]MS-275联合顺铂对食管鳞癌的抗肿瘤作用[D]. 刘腾飞.郑州大学 2019
本文编号：3254676
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MG53对hUC-MSCs增殖和迁移的影响
第一部分：MG53蛋白在体外和体内延缓hUC-MSCs的衰老16图1.2MG53对hUC-MSCs周期和凋亡的影响A：流式检测细胞周期；B：周期统计图；C：AnnexinV/PI染色检测细胞凋亡；D：凋亡细胞统计图。*：与P5相比，P<0.05；#：与P10相比，P<0.05；：与P15相比，P<0.05。1.2.3MG53蛋白延缓hUC-MSCs的衰老前期研究表明MG53可以促进hUC-MSCs的增殖和迁移，并抑制凋亡。接下来我们重点观察MG53预处理对干细胞衰老的影响。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)的表达是细胞衰老的标志物。我们发现随着hUC-MSCs传代次数的增加，P10和P15hUC-MSCs的SA-β-Gal阳性细胞数显著增加（P<0.05），而MG53处理之后SA-β-Gal阳性细胞数明显减少（P<0.05，图1.3A和B）。此外，衰老细胞还表现为细胞形态变化和广泛的染色质重构，最显著的是衰老相关异染色质簇集(SAHF)的形成。DAPI染色后激光共聚焦显微镜观察，结果发现与P5代的hUC-MSCs相比，P10和P15hUC-MSCs胞体增大并呈扁平形状、细胞核面积明显变大且核内异染色质聚集程度增加；与相应的未处理组相比，MG53处理能够减小细胞核面积变大并减轻SAHF的形成（图1.3C-F，P<0.05）。核纤层蛋白B1(LaminB1)是可以维持细胞核骨架的完整性进而影响染色质分布参与
第一部分：MG53蛋白在体外和体内延缓hUC-MSCs的衰老19图1.4MG53对衰老细胞中衰老相关基因及SASP表达的影响A：Westernblot检测MG53蛋白在衰老干细胞中的表达；B：Westernblot检测各组衰老细胞中衰老相关基因P16、P21、P53、pCNA、Sirt1的表达；C：衰老相关基因P16、P21、P53、pCNA、Sirt1的灰度分析；D：qRT-PCR检测各组衰老细胞中衰老相关基因P16、P21、P53、Sirt1；E：qRT-PCR检测各组衰老细胞中炎症相关基因TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β的表达；F：炎症芯片检测各组细胞炎症因子释放的变化。*：与P5相比P<0.05；，#：与P15相比P<0.05。1.2.5MG53降低衰老hUC-MSCs中氧化应激水平我们进一步检测MG53对衰老的hUC-MSCs中氧化应激各个指标的影响。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cellular senescence: from anti-cancer weapon to anti-aging target[J]. Lifeng Yuan,Peter B.Alexander,Xiao-Fan Wang. Science China（Life Sciences）. 2020(03)
硕士论文
[1]SA/Col/SDF-1水凝胶负载BMSCs对脑损伤大鼠的神经修复作用[D]. 周建康.郑州大学 2019
[2]MS-275联合顺铂对食管鳞癌的抗肿瘤作用[D]. 刘腾飞.郑州大学 2019
本文编号：3254676
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