蛋白磷酸酶2A催化亚基下调参与人tau蛋白所致线粒体分裂融合和功能失衡

发布时间：2021-07-15 10:31

　　目的探讨蛋白磷酸酶2A催化亚基（PP2Ac）下调是否参与人tau蛋白积聚引起的线粒体分裂融合动态及功能失衡的机制。方法大鼠原代海马神经元转染mito-dsRed质粒和人tau40质粒48 h后,共聚焦显微镜观测线粒体分布,免疫印迹检测线粒体分裂融合蛋白、PP2Ac及PP2A调节亚基b（PP2Ab）表达水平;大鼠原代海马神经元和野生型HEK293细胞（293wt）共转染siPP2Ac-EGFP质粒和mito-dsRed质粒48 h后,检测线粒体形态和分布;293wt细胞共转染siPP2Ac质粒和mito-Dendra2质粒40 h后,实时观测线粒体分裂融合动态;293wt细胞沉默PP2Ac表达后,检测线粒体分裂融合蛋白水平及细胞膜电位和细胞活力;稳定表达人tau的HEK293细胞（293htau）共转染PP2Ac-EGFP质粒和mito-dsRed质粒48 h后,分析线粒体分布和形态及功能。结果大鼠原代海马神经元表达人tau蛋白引起突起线粒体分布下降并伴有PP2Ac水平显著下降（t=4.814,P=0.0086）。下调PP2Ac表达引起大鼠原代海马神经元和HEK293细胞线粒体变长并异常... 

【文章来源】：中国医学科学院学报. 2020,42(03)北大核心CSCD

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【部分图文】：

大鼠原代海马神经元表达人tau与表达空载体组的线粒体分布和分裂融合蛋白水平的比较

表达PP2Ac的293htau细胞组与表达空载体组的线粒体形态分布和膜电位的比较

上调PP2Ac减轻293htau细胞线粒体形态分布和膜电位异常 293htau细胞分别共转染EGFP-vector质粒或EGFP-PP2Ac质粒和mito-dsRed质粒36 h后,共聚焦摄像分析线粒体形态分布结果显示,PP2Ac表达引起293htau细胞的线粒体平均长度明显变短(t=7.300,P<0.0001),细胞内正常短管状线粒体比例显著升高(t=8.303,P<0.0001),且线粒体均匀分布于胞体和突起的细胞比例显著增多(t=9.269,P<0.001)。线粒体相对膜电位分析结果显示,PP2Ac表达的293htau细胞与对照质粒表达细胞的基础相对膜电位显著升高(t=2.271,P=0.0395),但 CCCP 处理后两者相对膜电位差异无统计学意义(P>0.05)(图5)。图3 293wt细胞转染siPP2Ac质粒组与ssiPP2Ac质粒转染对照组的线粒体分裂融合动态(A)及绿色与红色共定位时间的比较(B)


本文编号：3285534