免疫负调控因子TIPE2改善APP/PS1小鼠认知缺陷的mRNA表达谱研究
发布时间：2021-08-15 15:50
实验目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种慢性进行性神经系统退行性疾病。近年来,随着研究的深入,发现患者脑内的慢性神经炎症对发病机制及疾病进展至关重要。TIPE2,即肿瘤坏死因子α诱导蛋白8-2（Tumornecrosis factor-α-induced protein-8-like 2,TNFAIP8L2）,一种新免疫负性调控蛋白,在APP/PS1转基因小鼠海马内高表达TIPE2可以改善认知功能障碍,然而高表达TIPE2后m RNA表达谱变化及认知改善的分子作用机制尚不清楚。因此,在本研究中,首先通过Y迷宫评价APP/PS1转基因小鼠和TIPE2高表达APP/PS1转基因小鼠的短期空间学习记忆功能,然后取其海马组织进行有参考基因组转录组测序（RNA sequencing,RNA-seq）并进行基因分析,以期找出与改善认知有关的基因和信号通路。实验方法:实验分组:（1）TIPE2高表达APP/PS1转基因小鼠（APP/PS1+OE）组;（2）注射空病毒载体的APP/PS1转基因小鼠（APP/PS1+NC）;（3）APP/PS1转基因小鼠（APP/PS...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
APP/PS1转基因小鼠基因型鉴定结果举例从左至右，前3只小鼠APP、PS1基因呈阳性后果，为转基因小鼠；后3只小鼠APP、β-actin324bp
结果17结果1APP/PS1转基因小鼠基因型鉴定以鼠尾提取的DNA为模板进行PCR扩增。结果如图1。图1：APP/PS1转基因小鼠基因型鉴定结果举例从左至右，前3只小鼠APP、PS1基因呈阳性后果，为转基因小鼠；后3只小鼠APP、PS1基因呈阴性结果，为野生型小鼠。两个基因为双转基因，鉴定结果相互一致，不能出现分离。2高表达TIPE2改善APP/PS1转基因小鼠认知功能障碍测量7月龄小鼠短期空间记忆的Y迷宫自发交替试验表明，与WT相比，APP/PS1转基因小鼠的自发交替率明显下降。在注射高表达TIPE2的腺相关病毒后的第0、1、2、3和3.5个月，我们再次采用Y迷宫对小鼠的认知能力进行评价。结果显示，高表达TIPE2后，APP/PS1转基因小鼠的认知缺陷显著改善且至少持续3.5个月。图2：AAV介导的TIPE2在APP/PS1转基因小鼠双侧海马高表达对认知陷的改善作用（a）小鼠脑立体定位图谱；（b）注射AAV后的第3.5个月TIPE2在小鼠海马内的分布情况；（c）在APP/PS1转基因小鼠注射AAV后的第0、1、2、3和3.5个月，用APPβ-actinPS1324bp608bp350bp
青岛大学硕士学位论文聚类分析用于判断 DEGs 在不同实验条件下的表达模式；在样品间表达量相关性高的基因被归为一类，通常这些基因在某些生物学过程，或者某个代谢、信号通路中存在实际的联系。因此通过表达量聚类我们可以发现基因间未知的生物学联系。我们使用 R 语言 Pheatmap 软件包对所有基因和样品进行双向聚类分析，根据同一基因在不同样品中的表达水平和同一样品中不同基因的表达模式进行聚类，采用Euclidean 方法计算距离，层次聚类最长距离法（Complete Linkage）进行聚类。结果见图 3c。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Genetic targeting of astrocytes to combat neurodegenerative disease[J]. Rachel Kéry,Allen P. F. Chen,Gregory W. Kirschen. Neural Regeneration Research. 2020(02)
本文编号：3344843
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
APP/PS1转基因小鼠基因型鉴定结果举例从左至右，前3只小鼠APP、PS1基因呈阳性后果，为转基因小鼠；后3只小鼠APP、β-actin324bp
结果17结果1APP/PS1转基因小鼠基因型鉴定以鼠尾提取的DNA为模板进行PCR扩增。结果如图1。图1：APP/PS1转基因小鼠基因型鉴定结果举例从左至右，前3只小鼠APP、PS1基因呈阳性后果，为转基因小鼠；后3只小鼠APP、PS1基因呈阴性结果，为野生型小鼠。两个基因为双转基因，鉴定结果相互一致，不能出现分离。2高表达TIPE2改善APP/PS1转基因小鼠认知功能障碍测量7月龄小鼠短期空间记忆的Y迷宫自发交替试验表明，与WT相比，APP/PS1转基因小鼠的自发交替率明显下降。在注射高表达TIPE2的腺相关病毒后的第0、1、2、3和3.5个月，我们再次采用Y迷宫对小鼠的认知能力进行评价。结果显示，高表达TIPE2后，APP/PS1转基因小鼠的认知缺陷显著改善且至少持续3.5个月。图2：AAV介导的TIPE2在APP/PS1转基因小鼠双侧海马高表达对认知陷的改善作用（a）小鼠脑立体定位图谱；（b）注射AAV后的第3.5个月TIPE2在小鼠海马内的分布情况；（c）在APP/PS1转基因小鼠注射AAV后的第0、1、2、3和3.5个月，用APPβ-actinPS1324bp608bp350bp
青岛大学硕士学位论文聚类分析用于判断 DEGs 在不同实验条件下的表达模式；在样品间表达量相关性高的基因被归为一类，通常这些基因在某些生物学过程，或者某个代谢、信号通路中存在实际的联系。因此通过表达量聚类我们可以发现基因间未知的生物学联系。我们使用 R 语言 Pheatmap 软件包对所有基因和样品进行双向聚类分析，根据同一基因在不同样品中的表达水平和同一样品中不同基因的表达模式进行聚类，采用Euclidean 方法计算距离，层次聚类最长距离法（Complete Linkage）进行聚类。结果见图 3c。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Genetic targeting of astrocytes to combat neurodegenerative disease[J]. Rachel Kéry,Allen P. F. Chen,Gregory W. Kirschen. Neural Regeneration Research. 2020(02)
本文编号：3344843
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