Aβ纤维诱导的星形胶质细胞活化和增殖在AD炎症机制中的研究

发布时间：2021-09-01 05:03

　　研究背景β淀粉样蛋白（amyloid-β,Aβ）存在单体、寡聚物、原纤维、纤维等多种聚集形式,Aβ斑块沉积作为AD发病的重要病理学标志,主要以纤维形式聚集而成。已有大量文献证实Aβ寡聚物对神经元、星形胶质细胞有明确毒性作用,而Aβ纤维对于星形胶质细胞的炎症诱导作用尚不明确。在AD模型鼠脑中,星形胶质细胞的形态和基因表达发生的显著变化导致突触连接中断,神经递质稳态失衡;Aβ斑块附近的星形胶质细胞变得活跃,发生反应性增生,反应性星形胶质细胞由此产生更多聚胺降解的有毒分子。异常折叠聚集的Aβ可以与星形胶质细胞上的模式识别受体结合,触发以炎症介质释放为特征的固有免疫反应。Aβ诱导的炎症反应可通过星形胶质细胞和小胶质细胞分泌的各种细胞因子和趋化因子激活细胞的各种信号通路导致神经退行性病变。因此Aβ纤维诱导的星形胶质细胞炎症反应及对神经元的影响是AD发病机制研究的重要方向。研究目的本研究旨在探讨Aβ纤维诱导星形胶质细胞活化和增殖所产生的炎症反应,包括iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β炎症介质的表达和MAPKs/NF-κB相关炎症通路蛋白的变化,及其对神经元的影响。旨在探讨Aβ纤维诱导的星形... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３－１－２免疫荧光检测不同浓度Ａｐ纤维对星形胶质细胞形态的影响（１００Ｘ）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１－２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?Ａ（３?ｆｉｂｅｒｓ?ｏｎ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ?（１００Ｘ）??

?项士学位论文???１６０－１?…??〇?１４０－?ｎｒ??Ｉ?１２０－??〇Ａｐ〇Ｈｉ?ｍ?１??０?１５?３０?＾?、＜ｄ?＾??图３－１－３?ＷＢ检测不同浓度ＡＰ纤维对星形胶质细胞ＧＦＡＰ表达的影响??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１－３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?Ａｐ?ｆｉｂｅｒｓ?ｏｎ?ＧＦＡＰ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ?ｂｙ?ＷＢ??本节研究通过ＣＣＩＣ－８法检测不同浓度下Ａ（３纤维对星形胶质细胞存活率，筛??选出合适的Ａｐ纤维作用浓度（１５ｐｍｏｌ／Ｌ、３０ｐｍ〇ｌ／Ｌ）作为后续研宄的依据，结??果提示直接法和间接法均对星形胶质细胞具有活化作用，且Ａ（３纤维刺激的星形??胶质细胞上清（间接法）在１０－３（Ｖｍ〇ｌ／Ｌ的浓度范围内以浓度依赖方式间接参与??了星形胶质细胞的活化并在１５－３０ｐｍ）ｌ／Ｌ明显增强了?ＡＰ纤维对星形胶质细胞的??活化。通过免疫荧光法检测不同浓度ＡＰ纤维对星形胶质细胞形态，观察到ＡＰ纤??维作用后的星形胶质细胞在形态上呈现活化增殖的改变。ＷＢ检测不同浓度ＡＰ??纤维对星形胶质细胞ＧＦＡＰ表达提示了?Ａ（３纤维浓度与星形胶质细胞的ＧＦＡＰ蛋白??表达成正比。综合以上结果说明，ＡＰ纤维在一定浓度下促进了星形胶质细胞的??活化和增殖。??３．２?Ａ（ｉ纤维促进了星形胶质细胞炎症介质ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｉｐ、ＩＬ－６和??ｉＮＯＳ的表达??将种于６孔板的第ＩＶ代星形胶质细胞予无血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基预处理??１２ｈ，随后分别以直接法及间接法作用于预处理后的星形胶质细胞。直接法：含??有不同浓度的Ａ（３纤维（Ｏ（ｉｍｏｌ／Ｌ、１５｜ｉｍｏｌ／Ｌ、３０｜ｉ

下降且具有统计??学意乂（／？星胶－神经元１５＾１１１。丨／１＜０．０１），神经兀的存活率在由３０（１１１１〇１／１＾八［３纤维浓度刺激??下的星形胶质细胞上清处理后明显下降，较星胶４申经元１５＾ｉｍｏｌ／Ｌ组的存活率更??为低下（／？雖？神经元３Ｇｆｉｍｏｌ／Ｌ＜０．０１）。以星股－神经兀０｜ＪｉＴｌ〇ｌ／Ｌ为对照组，＃＾？７＜０．０５，??＜０．０１，?—ｐ＜０．００１〇??１００ｎ??；■芊??！４０＇?Ｉ??２０－?■??〇??ｚ?〇Ｊ￣＾??，???Ｉ￣—??图３－４－１?ＣＣＫ－８检测Ａｐ纤维诱导的星形胶质细胞对神经元存活率的影响??Ｆｉｇｕｒｅ?３－４－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?Ａｐ?ｆｉｂｅｒ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｎｓ?ｂｙ?ＣＣＫ－８??由于动物脑内组织成分复杂，其组成细胞绝大部分为星形胶质细胞和神经??元，但由于二者相互交织在一起，目前的研宂手段很难将其分离开。为将研宄??对象准确定位于星形胶质细胞与神经元，进一步证明上述实验方法的科学性、??实验结果的可靠性，建立１种利用Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ板形成的星形胶质细胞－神经元的细胞??共培养体系，并在此体系基础上对原代神经元进行ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ细胞凋亡双??染法检测原代神经元的凋亡情况，与普通培养基加／换药方法产生的ＣＣＫ－８细胞??活性检测结果进行一致性比较。??将第ＩＶ代星形胶质细胞以１０％血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基接种于Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上??室中，待培养至细胞铺满上室的８０％－９０％?（此时下室中同为无细胞接种的１０％血??清ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基），后以


本文编号：3376314