原代星形胶质细胞α7 nAChRs激活PI3K/Akt信号通路调控HSP70抑制Aβ寡聚体聚集的机制研究

发布时间：2021-11-26 13:40

　　目的:探讨激活大鼠大脑皮层星形胶质细胞α7尼古丁乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptor,nAChRs）后通过激活PI3K/Akt信号通路调控HSF1、HSP70对Aβ寡聚体聚集的影响。方法:分离刚出生SD大鼠乳鼠大脑皮质的星形胶质细胞进行培养、纯化并传代,应用细胞免疫荧光的方法鉴定细胞的纯度;体外制备Aβ_1-42寡聚体;当细胞培养至21-29天时,此时经过传化培养后的原代星形胶质细胞基本成熟,将细胞分为空白对照组、α7 nAChRs激动剂（Nicotine、S24795、PNU282987）组、单独α7 nAChRs阻断剂（MLA）组、α7 nAChRs激动剂联合MLA处理组、单独PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002组、α7 nAChRs激动剂联合LY294002处理组以及单独的Aβ组、激动剂（Nicotine、S24795、PNU282987）+Aβ组、阻断剂LY294002+Aβ组。空白对照组不经过任何处理;α7 nAChRs激动剂组分别加入5μM/L三种不同的激动剂处理细胞6、12、18及24 h;单独α7 ... 

【文章来源】：贵州医科大学贵州省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

实验研究假设图

星形胶质细胞胞体变大，分支增多，增值生长迅速。此图为培养 26 天时星形胶质细胞形态。见图2-1。图 2-1 光镜下星形胶质细胞的形态图（x200）Fig. 2-1 Primary cultured astrocytes obsered under light microscope2.1.2 星形胶质细胞的免疫荧光鉴定待星形胶质细胞成熟（21 天）后，采用胶质细胞进行特异性蛋白抗体（GFAP）对其进行荧光染色。在尼康倒置显微镜下观察可见：星形胶质细胞（GDAP）被标记呈红色，细胞核被 DAPI 染成蓝色，而阴性对照组未检测到荧光。见图 2-2（A、B）。细胞计数当星形胶质细胞数量占所有细胞数量的 98% 以上时，培养的细胞可用于后续实验。

质细胞（呈红色），DAPI 染细胞核（一抗 GFAP（阴性对照组）; Scale bar= 星形胶质细胞细胞免疫荧光染色图(×2unofluorescence staining of primary g结果寡聚体的聚集情况，结果显示各种子量的多聚体较多。见图 2-3。

【参考文献】：
期刊论文
[1]β-淀粉样蛋白1-42寡聚体的制备、鉴定及其对星形胶质细胞的作用[J]. 黄小玉,杨灿洪,黄晓敏,麦汉滔,吕田明.  中华神经医学杂志. 2017 (02)
[2]PNU上调大鼠皮质星形胶质细胞内源性Cryab抑制Aβ聚集[J]. 任真奎,杨梅,官志忠,禹文峰.  中国老年学杂志. 2016(22)
[3]激活星形胶质细胞α7乙酰胆碱能受体抑制β-淀粉样蛋白的聚集[J]. 孔欣,禹文峰,官志忠.  中国老年学杂志. 2016(13)
[4]大鼠皮质星形胶质细胞尼古丁型乙酰胆碱受体的表达[J]. 孔欣,禹文峰,官志忠.  中国细胞生物学学报. 2016(04)
[5]星形胶质细胞在阿尔茨海默病发病机制中的作用[J]. 刘艳秋,盛树力,张新卿.  中华老年多器官疾病杂志. 2016 (02)
[6]热休克蛋白70对神经炎症的调节作用[J]. 余文雯,鲍秀琦,孙华,张丹.  药学学报. 2015(08)
[7]星形胶质细胞与阿尔茨海默病[J]. 吕田明,史翠丽,梁彦珊,黄小玉.  中华临床医师杂志(电子版). 2014(09)
[8]SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞的体外原代培养[J]. 汤婷婷,官志忠,禹文峰.  贵阳医学院学报. 2014(02)
[9]阿尔茨海默症的研究进展[J]. 葛润.  中外医学研究. 2014(09)
[10]热休克蛋白70在阿尔茨海默病中作用的研究进展[J]. 鲍娟,杨期东.  国际神经病学神经外科学杂志. 2008(03)

硕士论文
[1]激活原代星形胶质细胞α7尼古丁型乙酰胆碱能受体调控内源性Cryab抑制β-淀粉样蛋白聚集的机制研究[D]. 任真奎.贵州医科大学 2017
[2]体外培养星形胶质细胞α7尼古丁型乙酰胆碱能受体调控β-淀粉样蛋白聚集的作用[D]. 孔欣.贵州医科大学 2016



本文编号：3520261