mPFC脑区ghrelin/GHS-R1a信号参与焦虑样行为调控的细胞机制研究
发布时间：2022-01-20 09:21
以往研究报道调节进食和能量代谢的脑肠肽激素ghrelin及其功能性受体GHS-R1a对焦虑相关行为具有双相调节作用,但具体机制尚不清楚。应激刺激是创伤后应激障碍综合征（PTSD）等情感障碍性精神疾病的重要诱发因素。实验室前期结果表明:（1）4天反复禁锢应激导致内源性Ghsr1a在多个焦虑相关核团（内侧前额叶皮质m PFC、下丘脑HY及腹侧海马v HPC）表达上调。（2）Ghsr1a敲除（Ghsr1a KO）小鼠的基础焦虑水平与同窝野生型（WT）小鼠一致,但Ghsr1a缺失能缓解反复禁锢所致的小鼠焦虑相关行为障碍。（3）m PFC脑区αCa MKII+神经元过表达Ghsr1a不影响WT小鼠的基础焦虑水平,但能加重反复禁锢所致的WT小鼠焦虑相关行为障碍。本课题在前期研究的基础上,继续采用4天反复禁锢应激模型,借助Ghsr1a敲除、病毒介导的特定脑区Ghsr1a干扰、特定脑区特定类型神经元Ghsr1a过表达等研究方法,结合高架十字迷宫（elevated plus maze,EPM）、悬尾（tail suspension test,TST）、强迫游泳（forced swimming,FS）及社...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
反复禁锢后内源性Ghsr1a在mPFC的表达情况
青岛大学硕士学位论文 2. Ghsr1a KO 小鼠 mPFC 脑区内源性 Ghsr1a 敲除率的检测 为明确 4 天反复禁锢应激所致的内源性 Ghsr1a 在多个脑区表达上调是致焦虑还是抗焦虑，我们需要用 Ghsr1a KO 小鼠和同窝 WT 小鼠进行进一步的研究。首先我们通过 qRT-PCR 技术对 Ghsr1a KO 小鼠 mPFC 内源性 Ghsr1a mRNA 的表达情况进行了观察。结果显示与 WT 小鼠相比，Ghsr1a KO 小鼠 mPFC 脑区 Ghsr1a 的表达明显降低（unpaired t-test, p<0.05），从而可以证实 Ghsr1a KO 小鼠脑中的 Ghsr1a在 mPFC 这一脑区已被敲除。
洳课患案腥拘Ч?难橹?根据文献查阅及多次预实验结果，我们最终确定内侧前额叶皮质的病毒注射坐标为：前囟前1.8mm（AP+1.8mm），旁开0.5mm（ML+/-0.5mm），背腹-2.0mm（DV-2.0mm）。通过免疫荧光技术对mPFC脑区病毒感染位置及效果进行评估，感染位置不精确的小鼠的实验结果舍弃不用（Figure4a）。3.3mPFC脑区hGhsr1a过表达的定量分析我们通过qRT-PCR方法对病毒介导的hGhsr1a在mPFC脑区的表达情况进行了检测，结果显示，过表达hGhsr1a的病毒注射4周后，WT和Ghsr1aKO小鼠mPFC脑区hGhsr1a的表达均明显增加（Figure4b）。图4病毒感染效果及hGhsr1a过表达的定量分析Figure4ViralinfectioneffectandquantitativeanalysisontheoverexpressionofhGhsr1a.a.Sampleofimmunofluorescencestainingimages.GreenisGFPandblueisthenucleusdyedbyDAPI.Thewhitecircleindicatestargetedviralinfectionarea.Immunofluorescencestainingresultswerealignedwithbrainatlasimagesatthesamesection.b.QuantitativeanalysisontheoverexpressionofhGhsr1ainmPFCbrainregionofWTandGhsr1aKOmice.Comparedwiththecontrolvirus-injectedgroup,theexpressionofhGhsr1ainthemPFCbrainregionofWTandGhsr1aKOmicewassignificantlyincreased(Two-wayANOVA,Sidak’smultiplecomparisonstest,p<0.0001).Alldataarerepresentedasmean±SEM.Thenvalueofeachgroupismarkedinthefigure,whichrepresentsthenumberofindividualsofeachgroupoftestmice.
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠在强迫游泳应激下脑区激活情况的研究[J]. 张颀,阮晶晶. 中国医药导刊. 2019(08)
[2]不确定性空瓶饮水刺激法和束缚应激法建立小鼠焦虑模型及比较[J]. 朱明好,蒋宁,周文霞. 中国药理学与毒理学杂志. 2019(02)
[3]Growth hormone releasing peptide 2 reverses anorexia associated with chemotherapy with 5-fluoruracil in colon cancer cell-bearing mice[J]. Simona Perboni,Cyril Bowers,Shinya Kojima,Akihiro Asakawa,Akio Inui. World Journal of Gastroenterology. 2008(41)
本文编号：3598571
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
反复禁锢后内源性Ghsr1a在mPFC的表达情况
青岛大学硕士学位论文 2. Ghsr1a KO 小鼠 mPFC 脑区内源性 Ghsr1a 敲除率的检测 为明确 4 天反复禁锢应激所致的内源性 Ghsr1a 在多个脑区表达上调是致焦虑还是抗焦虑，我们需要用 Ghsr1a KO 小鼠和同窝 WT 小鼠进行进一步的研究。首先我们通过 qRT-PCR 技术对 Ghsr1a KO 小鼠 mPFC 内源性 Ghsr1a mRNA 的表达情况进行了观察。结果显示与 WT 小鼠相比，Ghsr1a KO 小鼠 mPFC 脑区 Ghsr1a 的表达明显降低（unpaired t-test, p<0.05），从而可以证实 Ghsr1a KO 小鼠脑中的 Ghsr1a在 mPFC 这一脑区已被敲除。
洳课患案腥拘Ч?难橹?根据文献查阅及多次预实验结果，我们最终确定内侧前额叶皮质的病毒注射坐标为：前囟前1.8mm（AP+1.8mm），旁开0.5mm（ML+/-0.5mm），背腹-2.0mm（DV-2.0mm）。通过免疫荧光技术对mPFC脑区病毒感染位置及效果进行评估，感染位置不精确的小鼠的实验结果舍弃不用（Figure4a）。3.3mPFC脑区hGhsr1a过表达的定量分析我们通过qRT-PCR方法对病毒介导的hGhsr1a在mPFC脑区的表达情况进行了检测，结果显示，过表达hGhsr1a的病毒注射4周后，WT和Ghsr1aKO小鼠mPFC脑区hGhsr1a的表达均明显增加（Figure4b）。图4病毒感染效果及hGhsr1a过表达的定量分析Figure4ViralinfectioneffectandquantitativeanalysisontheoverexpressionofhGhsr1a.a.Sampleofimmunofluorescencestainingimages.GreenisGFPandblueisthenucleusdyedbyDAPI.Thewhitecircleindicatestargetedviralinfectionarea.Immunofluorescencestainingresultswerealignedwithbrainatlasimagesatthesamesection.b.QuantitativeanalysisontheoverexpressionofhGhsr1ainmPFCbrainregionofWTandGhsr1aKOmice.Comparedwiththecontrolvirus-injectedgroup,theexpressionofhGhsr1ainthemPFCbrainregionofWTandGhsr1aKOmicewassignificantlyincreased(Two-wayANOVA,Sidak’smultiplecomparisonstest,p<0.0001).Alldataarerepresentedasmean±SEM.Thenvalueofeachgroupismarkedinthefigure,whichrepresentsthenumberofindividualsofeachgroupoftestmice.
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠在强迫游泳应激下脑区激活情况的研究[J]. 张颀,阮晶晶. 中国医药导刊. 2019(08)
[2]不确定性空瓶饮水刺激法和束缚应激法建立小鼠焦虑模型及比较[J]. 朱明好,蒋宁,周文霞. 中国药理学与毒理学杂志. 2019(02)
[3]Growth hormone releasing peptide 2 reverses anorexia associated with chemotherapy with 5-fluoruracil in colon cancer cell-bearing mice[J]. Simona Perboni,Cyril Bowers,Shinya Kojima,Akihiro Asakawa,Akio Inui. World Journal of Gastroenterology. 2008(41)
本文编号：3598571
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