线粒体未折叠蛋白反应对Aβ蛋白聚集毒性的影响

发布时间：2022-02-05 01:07

　　【目的】探讨线粒体未折叠蛋白反应(UPR^mt)对阿尔茨海默病（AD）Aβ蛋白聚集毒性的影响。【方法】将秀丽线虫（Caenorhabditis elegans）线粒体外膜tomm-22、内膜E04A4.5以及atfs-1基因克隆并构建L4440干扰载体,转化HT115感受态细胞以制备tomm-22、E04A4.5和atfs-1 RNA干扰菌。研究tomm-22和E04A4.5 RNA干扰对转基因线虫AD疾病模型CL4176和CL2006瘫痪进程的影响。观察tomm-22和E04A4.5 RNA干扰后野生型线虫N2寿命,检测ATFS-1信号在抑制Aβ蛋白聚集毒性中的作用,分析tomm-22和E04A4.5 RNA干扰后转基因线虫SJ4100 UPR^mt动态变化,以及转基因线虫DA2123自噬水平。【结果】通过对线虫线粒体tomm-22和E04A4.5基因克隆及构建RNA干扰菌建立了UPR^mt模型,证实能够抑制AD疾病模型CL4176 Aβ蛋白聚集毒性并延缓其瘫痪进程。野生型N2在喂食tomm-22和E04A4.5 RNA干扰... 

【文章来源】：中山大学学报(医学科学版). 2017,38(04)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 总RNA提取及反转录
    1.3 c DNA扩增与克隆
    1.4 RNA干扰菌构建及线虫表型
    1.5 线虫培养及同步化
    1.6 线虫瘫痪率实验
    1.7 线虫寿命实验
    1.8 线粒体UPRmt检查
    1.9 自噬活性检测
2 结果
    2.1 RNA干扰菌构建
    2.2 RNA干扰效果观察
    2.3 tomm-22、E04A4.5 RNA干扰延缓CL4176瘫痪进程
    2.4 tomm-22、E04A4.5 RNA干扰对N2寿命和CL2006瘫痪的影响
    2.5 atfs-1 RNA干扰不影响线虫CL4176瘫痪进程
    2.6 tomm-22、E04A4.5 RNA干扰增强UPRmt反应
    2.7 tomm-22、E04A4.5 RNA干扰影响线虫自噬活性
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Nrf2通过上调自噬促进C17.2神经干细胞的增殖（英文）[J]. 杨晓红,王胜男,刘庆余,欧阳颖,李民,皮荣标.  中山大学学报(医学科学版). 2016(04)
[2]β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞自噬及其对V-ATPase表达的影响[J]. 张蓓,谷贝贝,范胜诺,赵嘉,赵仲艳,刘军.  中山大学学报(医学科学版). 2013(01)
[3]C.elegans中dyn-1基因对寿命和发育的影响[J]. 曹蕾,杨玉荣.  中国细胞生物学学报. 2012(08)



本文编号：3614281