截短型金属蛋白酶ADAM10对Aβ 42 的水解作用

发布时间：2022-02-15 07:06

　　阿尔兹海默症（AD）是最常见的导致痴呆的神经退行性疾病,随着社会的老龄化,发病人数也在逐渐增加。无论是在家庭层面还是社会层面,AD均造成了巨大的经济负担与精神负担。因此,目前关于AD的研究十分热门,在不少实验室中都进行着对其发病机制以及治疗方法的研究。然而,目前为止,在这两方面尤其是治疗上的研究均未取得重大突破,近年来多种治疗药物在临床实验上也均以失败告终。目前已批准的用于治疗AD的药物均为改善症状、延缓病程的药物,而正在研究中的药物除此之外还包括了从病理层面上来预防、缓解甚至是治愈该病的药物,以及神经保护和促进神经元再生的药物等。从病理角度治疗AD的药物的靶点主要是β淀粉样蛋白（Aβ）,因为关于AD的最热门学说莫过于90年代提出来的Aβ学说。该学说在各种实验研究或是临床上都得到了许多证据支持,并且也根据新得到的证据做出了许多更正与完善。该学说的主要观点为,Aβ的沉积造成了tau蛋白的过磷酸化、神经炎症、突触凋亡以及神经元的丢失等一系列病理变化,并最终导致痴呆症状。目前与其相关的并已上到临床的药物研究主要集中在能够减少Aβ生成的β分泌酶抑制剂、促进Aβ向脑外排出的药物以及针对Aβ的免疫... 

【文章来源】：军事科学院北京市

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

-sADAM10表达的SDS-PAGE电泳图

-sADAM10的westernblot鉴定

军事科学院硕士学位论文第15页1.3.2E-sADAM10的表达条件优化将上清与沉淀分别电泳后，结果见图3。图3E-sADAM10表达位置的SDS-PAGE电泳图m，marker；1，全菌；2，上清；3，沉淀可见表达主要出现在沉淀中，也即重组蛋白主要以包涵体形式存在。在进一步实验中，对表达条件进行了优化。优化的目的主要是为了增加可溶性表达，因此，主要通过降低温度和降低诱导剂浓度两个途径来增加可溶性表达。在原来的30℃诱导温度的基础上，又增加了20℃、25℃两个温度；在原来的1mmol/L诱导剂基础上，又增加了800μmol/L、400μmol/L、200μmol/L3个浓度。对全菌进行电泳与考染，结果见图4。图4E-sADAM10不同诱导表达条件优化后的SDS-PAGE电泳图A：1,2：30℃，IPTG800μmol/L，上清，沉淀;3,4：30℃，IPTG400μmol/L，上清，沉淀；5,6：25℃，IPTG800μmol/L，上清，沉淀；7,8：25℃，IPTG400μmol/L，上清，沉淀。

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组蛋白微生物表达系统的研究进展[J]. 黄浩,王阳,堵国成,康振.  生物产业技术. 2019(03)
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[4]影响毕赤酵母高效表达重组蛋白的主要因素及其研究进展[J]. 王庆华,高丽丽,梁会超,巩婷,杨金玲,朱平.  药学学报. 2014(12)
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[7]豇豆胰蛋白酶抑制剂和硫氧还蛋白的融合表达和活性测定[J]. 畅文军,王宇光,雷禄旺.  农业生物技术学报. 2006(02)
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博士论文
[1]神经退行性疾病病理及潜在治疗药物研究[D]. 张琳.中南大学 2013

硕士论文
[1]一种新型抗氧化酶抗阿尔兹海默症作用研究[D]. 秦薛.吉林大学 2016
[2]Apicidin对ADAM10的调控及其对阿尔茨海默病治疗的机制研究[D]. 胡小童.重庆医科大学 2016
[3]透皮增强肽TD1与表皮生长因子融合蛋白功能的研究[D]. 王姗姗.中国科学技术大学 2011



本文编号：3626161