Complexin-1/2过表达重组载体对阿尔茨海默病小鼠记忆损伤的实验研究

发布时间：2022-10-22 19:29

　　目的构建Complexin-1/2（CPLX-1/2）基因的重组腺相关病毒过表达载体p AAV-CPLX-1/2并研究其在阿尔茨海默病记忆损伤中的作用。方法将用Oligo 7软件对Genbank上小鼠CPLX-1/2m RNA的CDS两端序列进行分析,合成CPLX-1/2基因,构建过表达载体并转化至大肠杆菌Top10;选取正确的克隆进行PCR和测序鉴定。重组腺相关病毒载体测序正确后,转染AAV293细胞,包装腺相关病毒。将重组腺相关病毒经脑立体定位注射到三转基因阿尔茨海默病（3XTg-AD）小鼠海马CA3区,经免疫组化和Western-Blot检测CPLX-1/2蛋白表达情况,水迷宫检测CPLX-1/2过表达对3XTg-AD小鼠记忆的影响。结果 PCR及测序结果表明成功构建了含小鼠CPLX-1/2基因的重组腺相关病毒表达载体。CPLX-1/2在海马CA3表达显著增加。CPLX-1/2过表达显著改善3XTg-AD小鼠的记忆损伤。结论本研究成功构建了CPLX-1/2重组腺相关病毒过表达载体并在整体动物水平成功高效表达;CPLX-1/2过表达可显著改善3XTg-AD小鼠空间记忆的损伤。为在整... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物及分组
    1.2 主要材料与仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 PCR扩增CPLX-1、CPLX-2基因
        1.3.2目的基因同源重组入表达载体
        1.3.3转化感受态细胞及阳性克隆鉴定
        1.3.4腺相关病毒AAV9包装
        1.3.5腺相关病毒滴度检测
        1.3.6脑立体定位注射
        1.3.7脑组织冰冻切片
        1.3.8 Western blot
        1.3.9行为学检测
    1.4统计学分析
2结果
    2.1 PCR扩增目的基因片段
    2.2菌落PCR鉴定结果
    2.3 阳性克隆测序结果
    2.4 腺相关病毒滴度的测定
    2.5 3XTg-AD小鼠脑组织免疫组化染色
    2.6 3XTg-AD小鼠海马区CPLX-1/2蛋白变化
    2.7CPLX-1/2 过表达对3XTg-AD小鼠学习能力的影响
    2.8CPLX-1/2 过表达对3XTg-AD小鼠记忆能力的影响
3讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]电针对SAMP8小鼠行为学及APP mRNA和BACE-1 mRNA影响[J]. 郎尉雅,张海燕,刘忠锦.  中国临床解剖学杂志. 2015(05)



本文编号：3696731