调节Nrf2/ARE/HO-1通路抑制Aβ神经毒性损伤的机制研究

发布时间：2023-04-11 04:21

　　大量研究表明,氧化应激是神经退行性疾病阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的一个显著的病理特征。神经退变在除了有系统的氧化应激的表现外,在生物化学和神经病理水平,这些疾病的神经退变与脂质、核酸和蛋白的氧化损伤的标志物共存。鉴于氧化应激的病理影响,针对抗氧化损伤的治疗方法成为了治疗阿尔茨海默病等神经退行性疾病的靶标。 氧化应激(Oxidative stress, OS)与AD的发病密切相关。AD的病理特征之一为由beta-淀粉样蛋白(β-amyloid, Aβ)沉积形成的老年斑。AD发病机制的“Aβ学说”认为Aβ在特定脑区的聚集,介导氧化OS损伤,OS在AD的发生和进展中发挥主要的作用,AD患者脑中存在广泛的OS。Aβ可以在体内和体外诱导OS。最近研究显示,氧化应激促进Aβ的产生和聚集,反过来Aβ又诱导氧化应激,OS从而进一步增加Aβ的产生,如此在OS和Aβ之间形成恶性循环,促进AD的发生。因此,一项具有广泛前景的预防和治疗AD的方法为减弱或抑制Aβ诱导的氧化应激损伤。同时一些天然抗氧化剂,如石杉碱甲(Huperzine A),姜黄(Curcumin),银杏(G...

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 Astaxanthin通过ERK1/2通路上调HO-1的表达抑制Aβ诱导的神经毒性损伤
    材料与方法
        1. 材料
            1.1 主要药品及试剂
            1.2 主要仪器
            1.3 有关溶液的配制
        2. 方法
            2.1. SH-SY5Y细胞的培养以及处理
            2.2. 纤维状Aβ_25-35的制备
            2.3. 细胞活力MTT检测
            2.4. 细胞凋亡检测:Hoechst染色
            2.5. 细胞内ROS测定
            2.6. 线粒体膜电位的测定
            2.7. Western Blot免疫印迹
            2.8. Stripping for reprobing western blots
            2.9. 统计分析
    实验结果
        3.1. 虾青素改善Aβ_25-35诱导的细胞损伤
        3.2. 虾青素阻止Aβ_25-35诱导的细胞凋亡的发生
        3.3. 虾青素抑制Aβ_25-35诱导的氧化应激损伤
        3.4. 虾青素抑制Aβ_25-35诱导的线粒体膜电位的降低
        3.5. 虾青素上调Bcl-2/Bax的表达水平比例
        3.6. 虾青素抑制Aβ_25-35诱导的MAPKs的激活
        3.7. 虾青素诱导HO-1的表达
        3.8. Aβ_25-35诱导HO-1的表达
        3.9. 虾青素通过上调HO-1表达来抑制Aβ_25-35介导的细胞毒性
        3.10. ERK1/2参与虾青素诱导的HO-1表达
        3.11. ERK1/2抑制剂逆转虾青素抑制Aβ_25-35神经毒性损伤的保护作用
    小结
第二部分 麦角甾苷通过ERK1/2和P13K/Akt上调Nrf2依赖的HO-1表达抑制Aβ诱导的神经毒性
    材料与方法
        1. 材料
            1.1. 实验动物
            1.2. 主要药品及试剂
            1.3 主要仪器
            1.4. 有关溶液的配制
        2. 方法
            2.1. SH-SY5Y细胞的培养以及处理
            2.2. 纤维状Aβ_25-35的制备
            2.3. 细胞活力MTT检测
            2.4. 细胞凋亡检测
            2.5. Calcein染色
            2.6. 细胞内ROS测定
            2.7. 线粒体膜电位的测定
            2.8. 冰冻脑组织切片的制备
            2.9. 蛋白的免疫组织化学染色
            2.10. PC12细胞免疫荧光
            2.11. 胞浆和胞核蛋白的提取
            2.12. Western Blot免疫印迹
            2.13. 统计分析
    实验结果
        3.1. 麦角甾苷抑制Aβ_25-35诱导的细胞损伤
        3.2. 麦角甾苷抑制Aβ_25-35诱导的凋亡
        3.3. 麦角甾苷抑制Aβ_25-35诱导的氧化应激损伤
        3.4. 麦角甾苷逆转Aβ_25-35诱导的线粒体膜电位的降低
        3.5. 麦角甾苷对凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达水平的影响
        3.6. 麦角甾苷抑制Aβ_25-35诱导的细胞色素c的释放
        3.7. 麦角甾苷抑制Aβ_25-35引起的Caspase-3的激活
        3.8. 麦角甾苷诱导HO-1的表达
        3.9. 麦角甾苷激活Nrf2
        3.10. 麦角甾苷通过ERK和PI3K/Akt激活Nrf2
        3.11. 麦角甾苷通过ERK和PI3K/Akt上调HO-1的表达
        3.12. 麦角甾苷通过上调HO-1的表达抑制Aβ诱导的神经毒性损伤
    小结
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
博士期间完成的其他工作
附录
致谢



本文编号：3789309