糖尿病并发抑郁症细胞模型的建立及中药保护作用

发布时间：2024-03-23 03:22

　　目的： 1.选择合适的葡萄糖与皮质酮干预浓度,建立DD细胞模型,从细胞功能形态学、葡萄糖消耗量、单胺递质及神经再生相关指标等不同维度确立模型评价体系,为DD的实验研究奠定基础。 2.以所建DD模型细胞为研究对象,给予中药复方左归降糖解郁方干预,明确其降糖和抗抑郁作用,并初探其治疗DD的作用机理,为DD的防治提供新思路和新方法。 方法： 1.DD细胞模型的建立。(1)DD细胞模型诱导剂的选择。离体培养原代海马神经元细胞7d,按诱导剂浓度不同随机分为9组。通过细胞存活率选择最佳的葡萄糖与皮质酮干预浓度组合。(2)DD细胞模型的建立。按照(1)获得的诱导剂最佳浓度组合,建立DD细胞模型。按诱导剂随机分为4组：正常组(不做任何处理)；葡萄糖组(75mM/L葡萄糖干预)；皮质酮组(100-/L皮质酮干预)；葡萄糖联合皮质酮组(75mM/L葡萄糖联合100μM/L皮质酮干预)。诱导剂干预24h后,①功能形态学评价：神经细胞鉴定, MTT测定细胞存活率,TUNEL染色测定凋亡小体；②葡萄糖消耗量：葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法检测海马神经元细胞葡萄糖消耗值；③单胺递质：ELISA法测定...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 糖尿病并发抑郁症细胞模型的建立
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要实验试剂及溶液
        1.3 主要仪器
        1.4 主要溶液配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
            2.1.1 物品准备
            2.1.2 L-多聚赖氨酸包被培养板
            2.1.3 取材前准备工作
            2.1.4 胎鼠海马组织提取、海马神经元细胞分离和培养
        2.2 DD诱导剂的选择
            2.2.1 实验分组
        2.3 DD细胞模型的建立
            2.3.1 实验分组
        2.4 指标检测
            2.4.1 原代海马神经元细胞形态与功能检测
                2.4.1.1 神经细胞形态学检查
                2.4.1.2 神经细胞鉴定
                2.4.1.3 MTT比色法检测神经细胞存活率
                2.4.1.4 HE染色
                2.4.1.5 TUNEL染色法检测神经细胞凋亡率
            2.4.2 葡萄糖消耗量检测
            2.4.3 神经递质检测
            2.4.4 CREB、BDNF含量检测
        2.5 统计学处理
    3 实验结果
        3.1 DD诱导剂的选择
            3.1.1 海马神经元细胞形态与功能检测
                3.1.1.1 神经元细胞形态学检查
                3.1.1.2 神经元细胞鉴定
                3.1.1.3 MTT法检测神经细胞存活率
        3.2 DD细胞模型的建立
            3.2.1 原代海马神经元细胞形态与功能检测
                3.2.1.1 神经细胞形态学检查
                3.2.1.2 神经细胞鉴定
                3.2.1.3 MTT法检测神经细胞存活率
                3.2.1.4 HE染色
                3.2.1.5 TUNEL染色
            3.2.2 葡萄糖消耗量检测
            3.2.3 神经递质DA、NE、5-HT含量检测
            3.2.4 BDNF、CREB含量检测
    4 讨论
        4.1 DD细胞建模方法的选择
        4.2 DD细胞模型评价指标的确立
            4.2.1 糖尿病样指标评价
            4.2.2 抑郁样指标评价
        4.3 DD细胞模型与单纯糖尿病细胞模型、抑郁症细胞模型的区别
第二部分 左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型细胞的保护作用
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要实验试剂及溶液
        1.3 主要仪器
        1.4 主要溶液配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型细胞的保护作用研究
            2.2.1 实验分组
        2.3 指标检测
        2.4 统计学处理
    3 实验结果
        3.1 海马神经元细胞形态与功能检测
            3.1.1 神经元细胞形态学检查
            3.1.2 神经元细胞鉴定
            3.1.3 MTT法检测神经细胞存活率
            3.1.4 HE染色
            3.1.5 TUNEL染色
        3.2 葡萄糖消耗量检测
        3.3 神经递质DA、NE、5-HT含量检测
        3.4 BDNF、CREB含量检测
        3.5 NR2A、NR2B含量检测
    4 讨论
        4.1 左归降糖解郁方的组方原则及药物配伍意义
        4.2 左归降糖解郁方对DD模型细胞的保护作用
结论
创新点
致谢
参考文献
附录
    综述
        参考文献
    攻读硕士期间发表的论文
    攻读硕士期间参与的课题



本文编号：3935380