Zn 2+ 对阿尔茨海默症的损伤机制及干预药物的研究
发布时间：2024-12-21 22:05
阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD),俗称老年痴呆症,是一种慢性神经退行性疾病。其发病机制极其复杂,目前尚未完全阐明,亦无有效的治疗药物,是一个棘手的社会和医疗问题。AD有两个典型的病理特征,分别是淀粉样蛋白Aβ在胞外聚集形成的老年斑,以及过度磷酸化的tau蛋白在胞内聚集形成的神经纤维缠结。长期以来,无论是在临床药物开发还是在基础科学研究中,Aβ淀粉样蛋白级联假说一直占据主要地位。然而与Aβ相比,tau蛋白的病理变化与临床症状相关度更高,且由于靶向Aβ药物的接连失败,人们的注意力开始转向tau蛋白。Tau蛋白包括两大主要结构域:N-端的外伸结构域和C-端的微管结合结构域,后者决定了tau的生物学功能及AD病理发生。金属离子如铜、铁、锌、铝等的动态平衡与AD的发生发展密切相关,特别是Aβ聚集形成老年斑的过程和磷酸化tau蛋白聚集形成神经纤维缠结的过程,此外金属离子还与氧化应激、突触可塑性、神经毒性、自噬和凋亡等机制有关。然而Zn2+离子与tau蛋白微管结合域第三段重复序列(tau-R3)的研究尚未见文献报导。因此,论文的第一部分,是应用一系列先进的实验手段从分子、细...
【文章页数】：155 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
引言
第1章 文献综述
1.1 AD的重要性
1.2 AD研究概况的可视化分析
1.2.1 Citespace简介
1.2.2 数据收集
1.2.3 关键词共现分析
1.2.4 研究热点和前沿趋势分析
1.2.5 核心作者共现图谱分析
1.2.6 高产研究机构共现图谱分析
1.3 阿尔茨海默症的发病机制
1.3.1 淀粉样蛋白级联假说
1.3.2 Tau蛋白异常磷酸化假说
1.3.3 金属离子代谢紊乱假说
1.3.4突触损伤与AD
1.3.5 线粒体功能障碍与AD
1.3.6 自噬障碍与AD
1.4 天然产物(中药)对阿尔茨海默症的防治作用
1.4.1 中药干预阿尔茨海默症研究的可视化分析
1.4.2 本论文选用的几种代表性天然产物简介
1.5 选题的意义和目的
第2章 金属离子与tau-R3的作用机制研究
2.1 引言
2.2 材料
2.3 方法
2.3.1 等温滴定量热法
2.3.2 紫外分光光度法
2.3.3 硫磺素T荧光法
2.3.4 圆二色谱法
2.3.5 原子力显微镜观察tau-R3的聚集形态
2.4 结果
2.4.1 金属离子与tau-R3的结合
2.4.2 金属离子对tau-R3聚集的影响
2.4.3 金属离子对tau-R3二级结构的影响
2.4.4 原子力显微镜观察tau-R3聚集体的形态
2.5 讨论
2.6 小结
第3章 Zn2++R3对神经细胞的作用机制研究
3.1 引言
3.2 材料
3.3 方法
3.3.1 主要试剂的配制方法
3.3.2 细胞分组及前处理过程
3.3.3 细胞系培养
3.3.4 tau-R3-FITC和Zn2++R3-FITC在N2A细胞中的定位
3.3.5 细胞器荧光探针标记
3.3.6 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测细胞活力
3.3.7 流式细胞术检测ROS
3.3.8 原代神经元培养
3.3.9 细胞免疫荧光
3.3.10 免疫印迹试验
3.3.11 线粒体超氧化物的检测
3.3.12 线粒体耗氧量测试
3.3.13 线粒体膜电位检测
3.4 结果
3.4.1 Zn2+加剧了tau-R3对神经细胞的毒性
3.4.2 Zn2++R3在细胞中的定位
3.4.3 Zn2++R3对神经细胞tau病理的影响
3.4.4 Zn2++R3对神经细胞神经突触的影响
3.4.5 Zn2++R3对神经细胞线粒体的影响
3.4.6 Zn2++R3对神经细胞自噬的影响
3.5 讨论
3.6 小结
第4章 散发型AD小鼠模型的构建
4.1 引言
4.2 材料
4.3 方法
4.3.1 小鼠分组与处理
4.3.2 药物的分组与制备
4.3.3 鼠脑立体定位注射
4.3.4 旷场实验
4.3.5 Morris水迷宫实验
4.3.6 高架十字迷宫实验
4.3.7 新物体识别实验
4.3.8 场景恐惧实验
4.3.9 血脂和血糖水平的检测
4.3.10 冰冻切片
4.3.11 神经纤维缠结染色
4.3.12 尼氏染色
4.3.13 透射电镜
4.3.14 小鼠脑组织ATP的检测
4.4 结果
4.4.1 Zn2++R3对小鼠行为学认知能力的影响
4.4.2 生化指标的检测
4.4.3 Zn2++R3对小鼠脑组织tau病理的影响
4.4.4 Zn2++R3对小鼠脑组织神经突触的影响
4.4.5 Zn2++R3对小鼠脑组织线粒体的影响
4.5 讨论
4.6 小结
第5章 中药复方早期干预AD的研究
5.1 引言
5.2 材料
5.2.1 小鼠模型与药物
5.2.2 实验试剂
5.2.3 实验仪器
5.3 方法
5.3.1 小鼠分组与处理
5.3.2 免疫荧光检测小鼠脑内Aβ的表达与分布
5.4 结果
5.4.1 旷场实验检测小鼠的自发活动与探索能力
5.4.2 小鼠血清生化指标的检测
5.4.3 小鼠脑内Aβ病理相关指标的检测
5.4.4 小鼠脑内tau病理相关指标的检测
5.4.5 小鼠脑内突触病理相关指标的检测
5.5 讨论
5.6 小结
第6章 总结与展望
6.1 总结
6.2 展望
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果
本文编号：4018974
【文章页数】：155 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
引言
第1章 文献综述
1.1 AD的重要性
1.2 AD研究概况的可视化分析
1.2.1 Citespace简介
1.2.2 数据收集
1.2.3 关键词共现分析
1.2.4 研究热点和前沿趋势分析
1.2.5 核心作者共现图谱分析
1.2.6 高产研究机构共现图谱分析
1.3 阿尔茨海默症的发病机制
1.3.1 淀粉样蛋白级联假说
1.3.2 Tau蛋白异常磷酸化假说
1.3.3 金属离子代谢紊乱假说
1.3.4突触损伤与AD
1.3.5 线粒体功能障碍与AD
1.3.6 自噬障碍与AD
1.4 天然产物(中药)对阿尔茨海默症的防治作用
1.4.1 中药干预阿尔茨海默症研究的可视化分析
1.4.2 本论文选用的几种代表性天然产物简介
1.5 选题的意义和目的
第2章 金属离子与tau-R3的作用机制研究
2.1 引言
2.2 材料
2.3 方法
2.3.1 等温滴定量热法
2.3.2 紫外分光光度法
2.3.3 硫磺素T荧光法
2.3.4 圆二色谱法
2.3.5 原子力显微镜观察tau-R3的聚集形态
2.4 结果
2.4.1 金属离子与tau-R3的结合
2.4.2 金属离子对tau-R3聚集的影响
2.4.3 金属离子对tau-R3二级结构的影响
2.4.4 原子力显微镜观察tau-R3聚集体的形态
2.5 讨论
2.6 小结
第3章 Zn2++R3对神经细胞的作用机制研究
3.1 引言
3.2 材料
3.3 方法
3.3.1 主要试剂的配制方法
3.3.2 细胞分组及前处理过程
3.3.3 细胞系培养
3.3.4 tau-R3-FITC和Zn2++R3-FITC在N2A细胞中的定位
3.3.5 细胞器荧光探针标记
3.3.6 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测细胞活力
3.3.7 流式细胞术检测ROS
3.3.8 原代神经元培养
3.3.9 细胞免疫荧光
3.3.10 免疫印迹试验
3.3.11 线粒体超氧化物的检测
3.3.12 线粒体耗氧量测试
3.3.13 线粒体膜电位检测
3.4 结果
3.4.1 Zn2+加剧了tau-R3对神经细胞的毒性
3.4.2 Zn2++R3在细胞中的定位
3.4.3 Zn2++R3对神经细胞tau病理的影响
3.4.4 Zn2++R3对神经细胞神经突触的影响
3.4.5 Zn2++R3对神经细胞线粒体的影响
3.4.6 Zn2++R3对神经细胞自噬的影响
3.5 讨论
3.6 小结
第4章 散发型AD小鼠模型的构建
4.1 引言
4.2 材料
4.3 方法
4.3.1 小鼠分组与处理
4.3.2 药物的分组与制备
4.3.3 鼠脑立体定位注射
4.3.4 旷场实验
4.3.5 Morris水迷宫实验
4.3.6 高架十字迷宫实验
4.3.7 新物体识别实验
4.3.8 场景恐惧实验
4.3.9 血脂和血糖水平的检测
4.3.10 冰冻切片
4.3.11 神经纤维缠结染色
4.3.12 尼氏染色
4.3.13 透射电镜
4.3.14 小鼠脑组织ATP的检测
4.4 结果
4.4.1 Zn2++R3对小鼠行为学认知能力的影响
4.4.2 生化指标的检测
4.4.3 Zn2++R3对小鼠脑组织tau病理的影响
4.4.4 Zn2++R3对小鼠脑组织神经突触的影响
4.4.5 Zn2++R3对小鼠脑组织线粒体的影响
4.5 讨论
4.6 小结
第5章 中药复方早期干预AD的研究
5.1 引言
5.2 材料
5.2.1 小鼠模型与药物
5.2.2 实验试剂
5.2.3 实验仪器
5.3 方法
5.3.1 小鼠分组与处理
5.3.2 免疫荧光检测小鼠脑内Aβ的表达与分布
5.4 结果
5.4.1 旷场实验检测小鼠的自发活动与探索能力
5.4.2 小鼠血清生化指标的检测
5.4.3 小鼠脑内Aβ病理相关指标的检测
5.4.4 小鼠脑内tau病理相关指标的检测
5.4.5 小鼠脑内突触病理相关指标的检测
5.5 讨论
5.6 小结
第6章 总结与展望
6.1 总结
6.2 展望
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果
本文编号：4018974
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