NR1基因RNA干扰的海马神经干细胞体系的构建

发布时间：2025-01-05 21:42

　　 目的:构建NR1基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）的海马神经干细胞体系,用于离体水平研究NR1对精神分裂症模型海马神经发生的调控作用。方法:利用293T细胞,将病毒原液稀释至不同病毒梯度,经过逐孔稀释法检测慢病毒滴度;体外培养海马神经干细胞,分别加入MOI值为100、10、1的慢病毒,确定海马神经干细胞的最适MOI值;海马神经干细胞体系中加入浓度为200μmol/L的MK-801 24 h后,加入干扰NR1亚基的慢病毒12 h,通过荧光显微镜观察海马神经干细胞干扰效率,通过Western Blot检测转染后海马神经干细胞NR1的蛋白表达。结果:（1）重组的慢病毒滴度可达2×10～8²×10～9TU/m L。MOI值为100时,海马神经干细胞转染率可达90%;（2）Western Blot结果显示:感染慢病毒的海马神经干细胞中NR1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论:成功构建了NR1基因RNA干扰的海马神经干细胞体系,慢病毒介导的shRNA可有效的干扰海马神经干细胞中NR1亚基的表达,为进一步探讨NR1对精神分裂症海马神经发生...

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【文章目录】：
材料和方法
    1 材料
        1.1 主要试剂
        1.2 RNAi重组慢病毒载体
        1.3 实验动物
    2 方法
        2.1 逐孔稀释法病毒滴度的测定
        2.2 海马神经干细胞的原代培养
        2.3 海马神经干细胞MOI值的确定
        2.4 慢病毒干扰海马神经干细胞NR1亚基
        2.5 Western Blot检测海马神经干细胞NR1蛋白的表达
结果
    1慢病毒包装及病毒滴度测定
    2 MOI值的测定
    3 海马神经干细胞的转染效率
    4 海马神经干细胞NR1蛋白表达
讨论



本文编号：4023310