趋化因子CXCL1调控APP/PS1小鼠神经干细胞增殖与分化的机制研究

发布时间：2025-03-19 02:27

　　背景与目的 阿尔茨海默病是一种退行性脑病,也是痴呆症的最常见病因。在阿尔茨海默病中,执行认知功能的神经元的损伤导致痴呆症的发生;在晚期执行基本身体功能的神经元也会损伤,从而导致患者卧床不起,最终死于各种并发症。CXCL1是一种重要的趋化因子。在患有早期与非常早期阿尔茨海默病的患者的脑脊液中,CXCL1升高并且被认为是早期联合诊断阿尔茨海默病的指标之一。APP/PS1小鼠表达突变型人类早老素和突变型人淀粉样蛋白前体,是阿尔茨海默病经典的动物模型。在APP/PS1小鼠的脑脊液,CXCL1是否如在人类患者中一样出现异常改变?该问题尚无明确报导。在外周组织中,CXCL1主要由血管内皮细胞、活化的巨噬细胞和成纤维细胞表达和分泌。在脑组织中,CXCL1可以被神经元,小胶质细胞、少突胶质细胞和活化的星形胶质细胞表达和分泌。我们的前期研究发现高表达CXCL1的单核细胞参与APP/PS1小鼠血脑屏障的破坏,提示CXCL1可能参与阿尔茨海默病的发病,因此有必要阐明CXCL1的脑中来源。在本研究中,我们通过体内的免疫荧光共定位分析与体外的炎症细胞活化实验分析了在阿尔茨海默病中脑组织细胞分泌CXCL1的情况。神...

【文章页数】：86 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :AD模型小鼠脑脊液CXCL1 变化与细胞来源分析
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 实验动物与细胞
            2.1.2 实验试剂
            2.1.3 实验仪器
            2.1.4 实验工作液
        2.2 实验方法
            2.2.1 APP/PS1 小鼠的基因型鉴定
            2.2.2 小鼠脑脊液的收集
            2.2.3 免疫荧光双染法检测APP/PS1 小鼠脑内CXCL1 来源
            2.2.4 细胞培养与处理
            2.2.5 小鼠CXCL1mRNA表达分析
            2.2.6 小鼠CXCL1 蛋白表达分析
            2.2.7 数据统计
    3 结果
        3.1 APP/PS1 小鼠基因型鉴定结果
        3.2 CXCL1在12 月龄APP/PS1 小鼠脑脊液中升高
        3.3 CXCL1在12 月龄APP/PS1 小鼠脑中共定位于MAP2与F4/80
        3.4 RAW264.7 细胞被活化后合成与分泌CXCL1 增加
        3.5 BV2 细胞被活化后合成与分泌CXCL1 没有变化
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :趋化因子CXCL1对神经干细胞增殖与分化的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要仪器和试剂
            2.1.1 实验动物与细胞
            2.1.2 实验试剂
            2.1.3 实验仪器
            2.1.4 实验工作液
        2.2 实验方法
            2.2.1 神经干细胞的培养
            2.2.2 神经干细胞活力测定
            2.2.3 神经干细胞BrdU掺入实验及免疫荧光检测
            2.2.4 体内神经干细胞增殖检测
            2.2.5 神经干细胞体外分化实验及免疫荧光检测
            2.2.6 免疫印迹实验检测神经干细胞分化相关分子标记表达
            2.2.7 数据统计
    3 结果
        3.1 CXCL1 促进体外神经干细胞的增殖
        3.2 CXCL1 促进室管膜下区细胞的增殖
        3.3 CXCL1 抑制体外神经干细胞向星形胶质细胞分化
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :趋化因子CXCL1对神经干细胞活性氧生成及相关下游信号通路的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 实验动物与细胞
            2.1.2 实验试剂
            2.1.3 实验仪器
            2.1.4 实验工作液
        2.2 实验方法
            2.2.1 神经干细胞的培养与传代
            2.2.2 细胞内活性氧(ROS)检测
            2.2.3 免疫印迹实验检测信号通路相关蛋白的表达与修饰
            2.2.4 体内回复(rescue)实验
            2.2.5 线粒体膜电位检测
            2.2.6 数据统计
    3 结果
        3.1 CXCL1 通过增加NOX2/gp91phox表达促进神经干细胞活性氧生成
        3.2 CXCL1 导致神经干细胞Akt磷酸化水平升高
        3.3 CXCL1 对神经干细胞Stat3 磷酸化没有影响
        3.4 抑制活性氧生成能够阻断CXCL1 促进神经干细胞增殖的作用
        3.5 CXCL1 对神经干细胞的线粒体膜电位没有影响
    4 讨论
    5 结论
    本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：4036552