6-姜酚对阿尔茨海默病的神经保护作用及其机制研究

发布时间：2017-07-19 05:08

  本文关键词：6-姜酚对阿尔茨海默病的神经保护作用及其机制研究

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【摘要】：背景与目的：阿尔茨海默病(AD)是一种常见的发生于老年及老年前期的神经系统退行性疾病,以进行性认知功能障碍、记忆损害、个性改变以及精神行为异常为主要表现,WHO已将AD列为21世纪五大重点疾病之一。目前,用于治疗AD的药物只能在一定程度上改善AD的临床症状,而有效防止AD发生或者治愈AD的药物尚未出现。我们前期的研究发现,生姜提取物对p淀粉样蛋白(Aβ)诱导的AD模型鼠的行为功能障碍具有保护作用。而6-姜酚是从生姜中提取的酚类物质,是生姜提取物中的重要活性成分。本实验通过体外孵育的方法观察6-姜酚对Aβ-42聚集的影响,探讨6-姜酚对Aβ1-42所致的大鼠PC12细胞损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法：(1)Aβ1-42单独或与不同浓度的6-姜酚于37℃培养箱中共同孵育5d后,采用硫磺素T(ThT)荧光检测法分析6-姜酚对Aβ1-42聚集的影响；(2)未分化的PC12细胞经神经生长因子(NGF)作用5d分化为类神经元样细胞后,通过MTT实验检测不同浓度Aβ1-42对PC12细胞作用24、48及72 h后的细胞存活率及观察不同浓度6-姜酚对Ap1-42诱导细胞凋亡的保护作用；(3)通过Hoechst 33258核染色法检测6-姜酚对Aβ1-42致PC12细胞凋亡的细胞核形态改变；(4)采用流式细胞凋亡术进一步分析6-姜酚对Ap1-42致PC12细胞凋亡的保护作用；(5)采用DCFH-DA荧光探针法检测6-姜酚对Aβ1-42诱导PC12细胞产生氧自由基(ROS)的影响；(6)根据测定试剂盒检测6-姜酚对Aβ1-42诱导PC12细胞产生乳酸脱氢酶(LDH)、抗氧化物歧化酶(SOD)、细胞内丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的影响；(7)采用Western Blot检测6-姜酚对Aβ1-42诱导的PC12细胞糖原合成激酶3β (GSK-3β)、磷酸化GSK-3β (Ser9), Akt及磷酸化Akt (Ser473)表达的影响。结果：(1)6-姜酚与Ap1-42共同孵育5 d后的荧光强度均较Aβ1-42组显著降低,提示6-姜酚对Aβ1-42的聚集具有拮抗作用；(2)Aβ1-42作用于PC12细胞,细胞存活率与Aβ1-42的剂量及作用时间呈负相关,其中10 μM的Aβ1-42作用48 h对PC12细胞产生较为显著的损伤作用,因而我们以此作为AD的细胞模型,用于后续的实验研究；(3)MTT实验结果显示,6-姜酚在80、120及200μM时均对Aβ1-42引起的细胞损伤具有显著的保护作用,并且在剂量为120μM时具有最佳的作用效果；(4)Hoechst 33258核染色及流式细胞凋亡术实验均提示6-姜酚在80、120及200μM时对Aβ1-42引起的细胞损伤具有显著的保护作用；(5)Aβ1-42显著增加细胞内ROS与MDA的含量及培养液中LDH的活性及NO的水平,而经6-姜酚预处理4h后ROS、MDA与NO的含量及LDH的活性均较Aβ1-42处理组显著降低；此外,6姜酚处理组的SOD水平显著高于Aβ1-42处理组的；(6)PC12细胞经Aβ1-42作用48 h后,GSK-3β及Akt的磷酸化水平均较正常组显著降低,而80及120μM6-姜酚处理组中GSK-3β及Akt的磷酸化水平则均显著高于Aβ1-42处理组的。结论：(1)6-姜酚可拮抗Aβ1-42的聚集,因而可能具有神经保护作用；(2)6-姜酚对Ap1-42致PC12细胞损伤具有保护作用,可能与其抗氧化损伤、抗炎症作用,以及激活Akt的活性、抑制GSK-3β的活性有关。因此,6-姜酚对AD具有潜在的防治作用,其确切的作用机制有待进一步研究。
【关键词】：6-姜酚 β淀粉样蛋白 PC12细胞 细胞凋亡 阿尔茨海默病 氧化应激 炎症反应 Akt GSK-3β
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 个人简历3-7
• 本文主要缩写中英文对照表7-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 前言13-16
• 第一部分 6-姜酚抑制Aβ_(1-42)聚集并减小其神经毒性作用的研究16-37
• 1.1 材料17-19
• 1.1.1 主要试剂17-18
• 1.1.2 主要仪器18
• 1.1.3 主要试剂的配制18-19
• 1.2 方法19-24
• 1.2.1 体外实验观察6-姜酚对Aβ_(1-42)聚集的抑制作用19-20
• 1.2.2 PC12细胞的培养20-21
• 1.2.3 PC12细胞在NGF的作用下分化成神经元样细胞21
• 1.2.4 MTT比色法筛选Aβ_(1-42)致PC12细胞损伤的浓度21
• 1.2.5 MTT比色法观察6-姜酚对Aβ_(1-42)致PC12细胞损伤的影响21-22
• 1.2.6 Hoechst 33258核荧光染色法观察细胞凋亡的形态改变22
• 1.2.7 流式细胞术检测6-姜酚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞凋亡的影响22-23
• 1.2.8 荧光探针法检测6-姜酚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞产生ROS的影响23
• 1.2.9 LDH、SOD活性及MDA、NO含量检测23
• 1.2.10 统计学处理23-24
• 1.3 结果24-31
• 1.3.1 6-姜酚对Aβ_(1-42)聚集的抑制作用24
• 1.3.2 Aβ_(1-42)对PC12细胞存活率的影响24-25
• 1.3.3 6-姜酚对Aβ_(1-42)致PC12细胞损伤的抑制作用25-26
• 1.3.4 6-姜酚对Aβ_(1-42)致PC12细胞凋亡的细胞核形态改变26-27
• 1.3.5 流式细胞术分析6-姜酚对Aβ_(1-42)所致PC12细胞凋亡的影响27-28
• 1.3.6 6-姜酚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞产生ROS的影响28-29
• 1.3.7 6-姜酚对Aβ_(1-42)所致PC12细胞培养液中LDH活性的影响29-30
• 1.3.8 6-姜酚对Aβ_(1-42)所致PC12细胞培养液中SOD活性的影响30
• 1.3.9 6-姜酚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞产生MDA的影响30
• 1.3.10 6-姜酚对Aβ_(1-42)致PC12细胞培养液中NO含量的影响30-31
• 1.4 讨论31-37
• 第二部分 6-姜酚减缓Aβ_(1-42)致PC12细胞损伤的相关机制研究37-44
• 2.1 材料37-39
• 2.1.1 主要试剂37-38
• 2.1.2 主要仪器38-39
• 2.1.3 主要试剂的配制39
• 2.2 方法39-41
• 2.2.1 PC12细胞的培养39
• 2.2.2 实验分组及处理39
• 2.2.3 Western blot检测PC12细胞GSK-3β、β-GSK-3β、Akt及-Akt蛋白的表达39-41
• 2.2.4 统计学处理41
• 2.3 结果41-43
• 2.3.1 6-姜酚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞GSK-3β磷酸化水平的影响41-42
• 2.3.2 6-姜酚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞Akt磷酸化水平的影响42-43
• 2.4 讨论43-44
• 总结44
• 参考文献44-52
• 综述52-73
• 参考文献62-73
• 致谢73-74
• 攻读硕士学位论文期间(待)发表的论文74

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 Mingyue Jia;Mingyu Wang;Yi Yang;Yixin Chen;Dujuan Liu;Xu Wang;Lei Song;Jiang Wu;Yu Yang;;rAAV/ABAD-DP-6His attenuates oxidative stressinduced injury of PC12 cells[J];Neural Regeneration Research;2014年05期

2 王少鹏;杨光;;姜酚生物活性研究进展[J];中国公共卫生;2013年10期

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本文编号：561305