CMKLR1是β淀粉样蛋白的功能性受体

发布时间：2017-07-21 04:16

  本文关键词：CMKLR1是β淀粉样蛋白的功能性受体

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【摘要】：β-淀粉样蛋白(Aβ)通过神经毒性作用，激活小胶质细胞或星型胶质细胞内吞及释放各种炎症调节因子，在阿尔茨海默病(Alzheimer’sDisease, AD)的发生发展过程中发挥重要作用。研究发现，AD病人及外周注射LPS的小鼠脑内，CMKLR1受体表达明显上调；APP/PS1AD模型小鼠脑内, Aβ与CMKLR1受体共表达；Aβ能与CMKLR1发生特异性结合；Aβ能诱导原代小胶质细胞,N9细胞及CMKLR1-RBL稳转细胞株迁移；应用ERK及Akt信号通路抑制剂PD98059，LY294002后,Aβ诱导的细胞迁移作用被显著抑制（*p=0.0015,0.0036），但Ca2+信号通路阻断剂U73122却不影响Aβ诱导的迁移（*p=0.506）。此外，，Aβ能引起原代胶质细胞及CMKLR-RBL稳转细胞株CMKLR1受体发生内吞。 上述研究结果表明CMKLR1是Aβ的功能性受体，通过介导非依赖钙流的MAPK和PKA等信号通路，调节小胶质细胞的运动，而且这种调控作用可能与Aβ诱导的CMKLR1受体内吞有关。本论文首次发现CMKLR1是Aβ的功能性受体，为今后阿尔茨海默病的发病机制研究提供了一定的理论依据，为疾病的治疗提供了新靶点。
【关键词】：阿尔茨海默病 趋化因子样受体（CMKLR1） 小胶质细胞 星型胶质细胞 趋化迁移 内吞
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 目录5-8
• 符号说明8-9
• 中文摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 第一章 绪论13-19
• 1 阿尔茨海默病（AD）13-16
• 1.1 阿尔茨海默病(AD)研究现状13
• 1.2 阿尔茨海默病(AD)病理特征及发病机制13-14
• 1.3 β淀粉样蛋白14-15
• 1.4 β淀粉样蛋白的受体15-16
• 2 趋化因子样受体 1(CHEMOKINE-LIKE RECEPTOR1)16-17
• 2.1 Chemokine-like receptor 1 (CMKLR1)结构与分布16
• 2.2 Chemokine-like receptor 1 (CMKLR1)功能16-17
• 2.3 Chemokine-like receptor 1 (CMKLR1)脑内研究现状17
• 3 选题意义和研究内容17-19
• 3.1 选题意义17-18
• 3.2 研究内容18-19
• 第二章 CMKLR1 受体表达与 AD 相关19-28
• 1 材料和仪器19-20
• 1.1 原料与试剂19-20
• 1.2 仪器和设备20
• 1.3 溶液配制20
• 2 实验方法20-24
• 2.1 原代小胶质细胞，N9 细胞系内 mRNA 的提取扩增与反转录21-22
• 2.2 小鼠脑内炎症模型的构建及皮层与海马 RNA 的提取，扩增22-23
• 2.3 APP/PS1 小鼠海马，皮层大脑切片制备23
• 2.4 小鼠脑切片免疫荧光染色23-24
• 2.5 基因芯片数据分析24
• 3 实验结果24-27
• 3.1 原代小胶质细胞，N9 细胞株内 CMKLR1 受体有表达24
• 3.2 系统性注射 LPS 后，小鼠脑内 CMKLR1 表达量上调24-26
• 3.3 阿尔茨海默病人脑内，CMKLR1 受体表达量上调26
• 3.4 APP/PS1 小鼠中，CMKLR1 与 Aβ老年斑块共表达26-27
• 4 讨论27
• 5 小结27-28
• 第三章 CMKLR1 是 Aβ的一种功能性受体28-43
• 1 材料和仪器29-30
• 1.1 仪器和设备29
• 1.2 材料和试剂29
• 1.3 缓冲液，培养基，染液配置配制29-30
• 1.4 细胞30
• 2 实验方法30-35
• 2.1 CMKLR1 与 Aβ的结合实验30-32
• 2.2 Aβ诱导的趋化迁移实验32-34
• 2.3 钙流实验34-35
• 3.实验结果35-41
• 3.1 Aβ能够特异性地与 CMKLR1 受体相结合35-37
• 3.2 Aβ通过CMKLR1 受体诱导原代小胶质细胞，N9细胞，CMKLR1/RBL细胞迁移37-40
• 3.3 Aβ通过 CMKLR1 受体对钙流的影响40-41
• 4 讨论41
• 5 小结41-43
• 第四章 Aβ通过 CMKLR1 受体引起小胶质细胞迁移的信号通路43-61
• 1 材料和仪器44-46
• 1.1 仪器和设备44
• 1.2 材料和试剂44-45
• 1.3 溶液配制45-46
• 1.4 细胞46
• 2 实验方法46-53
• 2.1 不同的信号通路抑制剂对 Aβ诱导的趋化迁移作用的影响46-49
• 2.2 Aβ作用 CMKLR1 受体后，信号通路中各种激酶磷酸化变化的水平49-53
• 3 实验结果53-59
• 3.1 钙流信号通路阻断剂 PLC 抑制剂 U73122 与 PKC 抑制剂 SC-24003 不能抑制 Aβ诱导的迁移53-56
• 3.2 Aβ通过 CMKLR1 受体诱导趋化迁移，激活的信号通路56-59
• 4 讨论59-60
• 4.1 Aβ作用于 CMKLR1 受体后，诱导细胞迁移，激活的下游的信号通路独立于钙流信号通路59
• 4.2 Aβ作用 CMKLR1 受体诱导迁移，激活的下游的信号通路59-60
• 5 小结60-61
• 第五章 Aβ引起 CMKLR1 受体内吞61-72
• 1.实验材料62-63
• 1.1 仪器和设备62
• 1.2 材料和试剂62
• 1.3 实验动物与细胞62-63
• 1.4 溶液配制63
• 2 实验方法63-66
• 2.1 细胞的制备63-64
• 2.2 免疫荧光共沉淀64-65
• 2.3 质粒共转65-66
• 3 实验结果66-71
• 3.1 Aβ诱导 CMKLR/RBL 细胞 CMKLR1 内吞66
• 3.2 原代小胶质细胞中 Aβ通过 CMKLR1 受体内吞66-68
• 3.3 原代星型胶质细胞中 Aβ通过 CMKLR1 受体内吞68-70
• 3.4 Aβ作用于 CMKLR1 受体，能够引起β-arrestin2 上膜70-71
• 4 讨论71
• 4.1 Aβ能够引起 CMKLR1 受体内吞71
• 4.2 Aβ通过作用于原代小胶质细胞和星型胶质细胞上的 CMKLR1 受体，能够被吞噬进入细胞71
• 4.3 Aβ作用 CMKLR1 受体，诱导β-arrestin 上膜，激活下游信号通路，引起趋化迁移，受体内吞等生物学功能71
• 5 小结71-72
• 第六章 总结与展望72-74
• 1 总结72-73
• 1.1 CMKLR1 受体与阿尔茨海默疾病及脑内炎症有关72
• 1.2 CMKLR1 受体是 Aβ的受体，Aβ能够通过 CMKLR1 受体诱导原代小胶质细胞，N9 细胞发生趋化72
• 1.3 Aβ通过 CMKLR1 受体诱导趋化迁移的信号通路72
• 1.4 Aβ通过 CMKLR1 受体被吞噬进入细胞72-73
• 2 展望73-74
• 参考文献74-79
• 致谢79-80
• 攻读硕士期间主要研究成果80-81
• 基金资助项目81-82
• 附件82

【共引文献】

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本文编号：571391