NR1在吗啡精神依赖大鼠相关脑区中的表达及左旋延胡索乙素的干预作用

发布时间：2017-07-29 07:06

  本文关键词：NR1在吗啡精神依赖大鼠相关脑区中的表达及左旋延胡索乙素的干预作用

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【摘要】：目的:观察吗啡诱导条件性位置偏爱(Conditioned Place Preference,CPP)大鼠在CPP获得与消退不同阶段脑奖赏神经环路中脑腹侧被盖区-伏核-前额叶皮质(VTA-NAc-PFC),以及吗啡耐受细胞中N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基NR1的表达变化,从组织和细胞水平揭示NR1在吗啡诱导精神依赖中的作用;并在上述实验基础上,观察用左旋延胡索乙素(l-THP)治疗后,对大鼠吗啡CPP效应以及NAc核团中NR1表达变化的影响,为l-THP治疗阿片类依赖的应用补充新的实验依据。方法:1、大鼠吗啡CPP获得阶段VTA-NAc-PFC神经环路各脑区NR1的表达筛选出合格的SD大鼠,随机分成生理盐水(NS)对照组和吗啡CPP模型组,对各组大鼠采用剂量递增法(吗啡起始剂量从d1的10 mg/kg至d10的100 mg/kg)分别进行颈背部皮下注射生理盐水和吗啡,每次注射20 min后置黑、白箱中进行训练(白箱为吗啡伴药箱),连续注射10 d。在末次训练48 h后进行CPP测试,确认大鼠吗啡CPP模型建立成功后,立即将各组大鼠处死并取材(VTA、NAc、PFC),分别采用PCR和Western blot技术检测其NR1的表达变化。2、大鼠吗啡CPP消退阶段VTA-NAc-PFC神经环路各脑区NR1的表达变化利用上述方法建立大鼠吗啡CPP模型后,分别将NS对照组和吗啡CPP组大鼠自然放置28天进行CPP检测,确定大鼠吗啡CPP效应消失,立即将两组大鼠处死并取材(VTA、NAc、PFC),分别采用PCR和Western blot技术检测其NR1的表达变化。3、吗啡耐受神经元细胞中NR1的表达变化培养皮层神经元细胞,设置NS对照组和吗啡实验组,分别加入NS及10μmol/l吗啡,48 h后分别收集细胞,提取蛋白质,采用Western blot方法检测其细胞中NR1的表达。4、l-THP治疗对大鼠吗啡CPP效应和NAc脑区中NR1表达的影响利用上述方法在建立大鼠吗啡CPP模型的基础上,将大鼠分成6组:NS对照组、吗啡CPP组、NS治疗组、l-THP低、中、高剂量治疗组。在确认大鼠吗啡CPP模型建立成功后,对NS对照组和吗啡CPP组大鼠立即处死并取材;剩余4组大鼠,除NS治疗组灌胃用NS外,其他l-THP低、中、高剂量治疗组大鼠则分别给予l-THP 0.94mg/kg、1.88 mg/kg和3.76 mg/kg进行灌胃治疗,持续治疗6 d再次检测CPP后即刻处死并取NAc脑组织。采用Western blot技术检测其在NAc脑区中NR1的表达。结果:1、大鼠吗啡CPP获得阶段VTA-NAc-PFC神经环路各脑区NR1的表达在吗啡注射末次训练48 h后,经过CPP测试,NS对照组大鼠在白箱停留的时间在训练前后无明显差异(训练前393±81 s、训练后为416±58 s)。吗啡CPP组大鼠训练后与训练前比较,训练后在白箱中的停留时间明显延长(训练前408±93 s、训练后528±81 s)(P0.01)。同时吗啡CPP组与NS对照组比较,CPP模型组大鼠训练后在白箱中停留时间明显延长(P0.01)。吗啡CPP组与NS对照组比较,大鼠NAc中NR1 m RNA表达水平较NS对照组显著增加,具有统计学意义(P0.05),而大鼠吗啡CPP组VTA和PFC的NR1 m RNA水平较NS对照组虽有增加但无统计学差异(P0.05)。对于NR1的蛋白表达,大鼠吗啡CPP组NAc中NR1蛋白表达较NS对照组显著增加(P0.01),而VTA和PFC脑区的NR1蛋白水平在两组之间比较同样增加,但同样无统计学意义(P0.05)。2、大鼠CPP消退阶段VTA-NAc-PFC神经环路各脑区NR1的表达在大鼠吗啡CPP建立成功并自然消退28d进行CPP检测:生理盐水对照组大鼠在白箱中停留的时间为410±69 s,吗啡诱导的CPP组大鼠在白箱中停留的时间为396±117 s,两组大鼠白箱停留时间比较无统计学差异(P0.05);两组大鼠VTA、NAc、PFC各脑区NR1 m RNA以及蛋白表达水平之间比较亦无显著性差异(P0.05)。3、吗啡耐受细胞中NR1的表达变化在吗啡加入神经元细胞培养后48 h,与生理盐水对照组比较,吗啡实验组细胞中NR1的蛋白表达水平显著增加(P0.01)。4、l-THP治疗对大鼠吗啡CPP效应及NAc脑区中NR1表达的影响在末次训练48 h后,NS对照组大鼠训练前后在白箱中的停留时间分别为383±62s和401±76 s;吗啡CPP组为407±83 s和528±40 s;NS治疗组为386±75 s和527±55 s,治疗6天后为524±79 s;l-THP低剂量治疗组训练前后分别为396±81 s和523±32 s,治疗6天后为519±47 s;l-THP中剂量治疗组训练前后分别为389±95 s和528±42 s,治疗6天后为386±76 s;l-THP高剂量治疗组训练前后分别为399±65 s和536±67 s,治疗6天后为386±88 s。与NS对照组比较,大鼠吗啡CPP模型组、NS治疗组、l-THP低、中、高剂量治疗5个组大鼠在白箱中停留时间明显增加(均P0.01);经不同浓度的l-THP治疗6 d后,与NS治疗组比较,l-THP中、高剂量治疗组大鼠在白箱的停留时间减少(均P0.01)。与NS治疗组比较,l-THP中、高剂量治疗组大鼠NAc中NR1蛋白含量明显降低(P0.05)。结论:1.NR1 m RNA和蛋白在大鼠吗啡CPP获得阶段NAc脑区表达增加,而在吗啡CPP消退阶段均恢复到对照组水平,结合在吗啡处理神经元细胞中NR1蛋白表达的增多,提示NR1表达的改变在吗啡精神依赖形成中发挥有一定的作用,可能是吗啡精神依赖形成的机制之一;2.l-THP通过逆转NAc脑区中NR1蛋白的异常表达,可能是加速吗啡CPP效应消退的又一药理作用机制。
【关键词】：吗啡 伏核 NR1 精神依赖 左旋延胡索乙素
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.61
【目录】：

• 中英缩略词对照表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-15
• 1 材料与方法15-23
• 2 结果23-29
• 3 讨论29-31
• 4 结论31-32
• 参考文献32-35
• 综述：NMDA受体在阿片类精神依赖中作用35-42
• 参考文献39-42
• 致谢42-43
• 作者简介43

【参考文献】

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本文编号：587909