人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达

发布时间：2017-08-05 11:34

  本文关键词：人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达

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【摘要】：目的构建HSP75基因重组腺病毒载体,观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域,构建重组穿梭质粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM转染试剂的介导下与腺病毒辅助骨架质粒p HBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒,TCID50法测定病毒滴度。使用荧光显微镜、流式细胞仪和Western blotting观察重组腺病毒在C17.2细胞中的感染情况及HSP75蛋白的表达水平。结果通过酶切鉴定、测序、PCR鉴定,HSP75基因已正确插入穿梭质粒中,并与病毒骨架质粒整合包装成重组腺病毒;重组腺病毒滴度为1.0×1010PFU/ml;Western blotting检测,转染后的神经干细胞表达HSP75蛋白。结论 HSP75重组腺病毒载体成功构建,对C17.2神经干细胞具有较高的表达效力。
【作者单位】： 南方医科大学珠江医院药剂科;广州市中西医结合医院药剂科;南方医科大学珠江医院烧伤科;南海区第三人民医院药剂科;
【关键词】： 热休克蛋白 重组腺病毒载体 C.神经干细胞
【基金】：国家自然科学基金项目(No.30973162) 广东省自然科学基金项目(No.S2012010008199;No.S2013010015546)
【分类号】：R749.16
【正文快照】： 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是以认知功能进行性下降和情感障碍为特点的神经退行性疾病,临床上早期主要表现为记忆力减退、生活自理能力下降,最终导致进行性认知功能缺失、生活自理能力完全丧失和神经行为异常[1-2]。其中β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)介导

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本文编号：624700