伏隔核CART肽抑制可卡因行为敏感性产生的相关机制研究

发布时间：2017-08-06 18:28

  本文关键词：伏隔核CART肽抑制可卡因行为敏感性产生的相关机制研究

  更多相关文章： 伏隔核 CART 可卡因 多巴胺信号通路

【摘要】：目的:反复使用成瘾药物能够上调多巴胺信号通路,激活伏隔核区突触后神经元的DA受体,激活环磷酸腺苷-蛋白激酶A(c AMP-PKA)信号转导通路,激活核内的转录因子c AMP反应元件结合蛋白(CREB),产生引起和维持行为敏感性所需的蛋白质。这些多巴胺信号通路的相关变化将促使行为敏感化的表达。可卡因安非他明调节肽(Cocaine and amphetamine regulator transcript,CART)是成瘾药物奖赏的关键性调控因子。经研究报道证实伏隔核的CART活性肽不仅能够改变大鼠的活动性,并且还可稀释成瘾药物产生的奖赏效应。本研究通过一系列实验将CART肽通过脑立体定位注射途径注射到伏隔核区域,观察其对(1)CREB蛋白磷酸化水平的影响,(2)多巴胺受体信号和(3)胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化激酶信号的影响。方法:选取健康的成年雄性SD(Sprague Dawley)大鼠,体重为260-280g。随机分为4组:(1)生理盐水组(伏隔核脑立体定位注射生理盐水+腹腔注射生理盐水);(2)可卡因组(伏隔核脑立体定位注射生理盐水+腹腔注射可卡因15mg/kg);(3)CART肽低剂量组(伏隔核脑立体定位注射CART肽1.0μg+腹腔注射可卡因15mg/kg);(4)CART肽高剂量组(伏隔核脑立体定位注射CART肽2.5μg+腹腔注射可卡因15mg/kg);分组完成后,(1)对实验用SD大鼠做脑部立体定位注射手术,植入微量注射套管至脑伏隔核区域(A/P+1.7,L/M±1.6,D/V 7.5)。检测如下指标:(1)行为学大鼠运动活性的测定;(2)尼氏染色确定注射部位为伏隔核位置;(3)Western Blot检测D1R、D2R蛋白表达水平;(4)免疫共沉淀方法检测伏隔核区D3R蛋白的磷酸化水平;(5)Western Blot检测ERK、P-ERK、CREB、P-CREB蛋白表达水平。结果:1、大鼠行为学分析结果表明,CART肽呈剂量依赖型抑制可卡因引起的行为敏感化。与生理盐水组相比,可卡因组连续七天的活动水平均明显增加(***p0.001)。与第一天注射可卡因引起的行为活动性相比,从第二天起可卡因引起的行为活动性明显增强,行为敏感性表达,并且在注射可卡因后第五天行为敏感性达最高峰(+++p0.001)。与可卡因组相比,CART肽低剂量组与CART肽高剂量组中可卡因引起的自发活动性与行为敏感性显著性降低(##p0.01和###p0.001),其中CART肽高剂量组的自发活动性与行为敏感性较生理盐水组的无显著差异。因此可以推断,CART肽低剂量组部分抑制可卡因诱导的自发活动性和行为敏感性的产生,CART肽高剂量组则可以完全抑制。2、蛋白印迹分析结果表明,CART肽呈剂量依赖型抑制可卡因诱导的D1R、D2R蛋白过表达。与生理盐水组相比,可卡因组中D1R、D2R蛋白表达水平显著性增加(**p0.01和***p0.001)。与可卡因组相比,CART肽低剂量组与CART肽高剂量组中D1R、D2R蛋白表达水平显著性降低(#p0.05和##p0.01)。3、免疫共沉淀分析结果表明,连续5天伏隔核脑立体定位注射CART肽能够降低可卡因诱导的D3R蛋白磷酸化水平。与生理盐水组相比,可卡因组中D3R蛋白磷酸化水平显著性增加(***p0.001)。与可卡因组相比,CART肽低剂量组与CART肽高剂量组中D3R蛋白磷酸化水平均显著性降低(##p0.01)。4、蛋白印迹分析结果表明,伏隔核微量注射CART肽能够呈剂量依赖型阻断可卡因诱导的细胞外信号调节激酶(ERK)与c AMP反应元件结合蛋白(CREB)的磷酸化水平。结果显示,与生理盐水组相比,可卡因组的ERK、CREB蛋白磷酸化水平均显著性升高(***p0.001)。与可卡因组相比,CART肽低剂量组与CART肽高剂量组中ERK、CREB蛋白磷酸化水平均显著性降低(##p0.01和###p0.001)。结论:定位注射至伏隔核的CART活性肽呈剂量依赖型抑制可卡因引起的大鼠行为敏感性的表达,其作用机制与阻断可卡因引起的大鼠脑中多巴胺信号通路(DR-ERK/CREB)的激活相关。
【关键词】：伏隔核 CART 可卡因 多巴胺信号通路
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.6
【目录】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 中英文缩略词表8-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料与方法14-24
• 2.1 实验材料14-18
• 2.1.1 实验动物14
• 2.1.2 实验药品14
• 2.1.3 主要试剂14-15
• 2.1.4 主要仪器设备15-16
• 2.1.5 主要试剂的配制16-18
• 2.1.6 主要溶液的配制18
• 2.2 实验方法18-24
• 2.2.1 实验分组18
• 2.2.2 脑部立体定位手术18-19
• 2.2.3 伏隔核微量注射及可卡因腹腔注射19
• 2.2.4 样本制备19-21
• 2.2.4.1 蛋白样品制备19-20
• 2.2.4.2 组织切片标本的制备20-21
• 2.2.5 行为学大鼠运动活性的测定21
• 2.2.6 尼氏染色（Nissl染色）21
• 2.2.7 免疫蛋白印迹21-22
• 2.2.8 免疫共沉淀22-23
• 2.2.9 统计学处理23-24
• 第3章 结果24-30
• 3.1 大鼠行为学实验的测定结果24-26
• 3.2 免疫蛋白印迹检测D1R、D2R蛋白表达水平26-27
• 3.3 免疫共沉淀检测D3R蛋白的磷酸化水平27-28
• 3.4 免疫蛋白印迹检测ERK、P-ERK、CREB、P-CREB蛋白表达水平28-30
• 第4章 讨论30-34
• 4.1 伏隔核CART肽对可卡因成瘾有重要的负调控作用30-31
• 4.2 伏隔核CART肽通过调控DR-ERK-CREB信号通路抑制可卡因成瘾31-32
• 4.3 总结32-34
• 第5章 结论与展望34-35
• 5.1 结论34
• 5.2 展望34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-41
• 附图41-42
• 攻读学位期间的研究成果42-43
• 综述43-49
• 参考文献47-49

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张芳;颜玲娣;宫泽辉;;CART肽参与疼痛、镇痛调节及可能机制[J];中国药物依赖性杂志;2006年02期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 孙习;伏隔核CART肽抑制可卡因行为敏感性产生的相关机制研究[D];南昌大学;2016年

，

本文编号：630997