β片层阻断肽H102对双转基因AD小鼠CaM-CaMKⅡ-CREB信号通路的影响

发布时间：2017-08-09 19:33

  本文关键词：β片层阻断肽H102对双转基因AD小鼠CaM-CaMKⅡ-CREB信号通路的影响

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【摘要】：目的:研究β片层阻断肽H102对APP/PS1双转基因小鼠行为学、脑内Aβ_(1-42)蛋白及CaMKⅡ-CREB信号通路相关蛋白p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、CaM、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB、ATF-1和cleaved caspase 3蛋白表达的影响,探讨H102对双转基因AD小鼠脑内CaM-CaMKⅡ-CREB信号通路的影响。方法:1、利用随机数字表法将双转基因AD小鼠分为模型组和H102给药组,并设同周龄同背景C57BL/6J小鼠为正常对照组。给药组每日鼻腔给予H102溶液(5.8 mg/kg)5μl,正常对照组和模型组每日鼻腔给予辅料溶液5μl,每日同样时间给药1次。连续给药4个月后,进行Morris水迷宫实验检测双转基因AD小鼠的空间学习记忆能力的变化。2、Morris水迷宫实验结束后,小鼠断头处死,在冰上解剖取脑,一半脑组织放入4%多聚甲醛溶液内固定,石蜡包埋制作切片,用于免疫组化法检测脑内Aβ_(1-42)、p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、p-CREB和cleaved caspase 3蛋白的表达;另一半分离海马及皮层保存于-80℃,用于western blot检测脑内Aβ_(1-42)、p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、CaM、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB、ATF-1和cleaved caspase 3蛋白的表达。结果1、Morris水迷宫检测3组双转基因AD小鼠的空间学习记忆能力(1)、定位航行实验结果:与正常组小鼠相比,模型组小鼠的逃避潜伏期显著延长(P0.01);与模型组小鼠相比,H102给药组的逃避潜伏期明显缩短(P0.05);H102给药组与正常组比较无显著性差异(P0.05)。(2)、空间探索实验结果:与正常组小鼠相比,模型组小鼠在第三象限停留的时间显著减少(P0.01),跨越隐匿平台的次数显著减少(P0.01),入水朝向角显著增大(P0.01);与模型组小鼠相比,H102给药组在第三象限停留的时间明显增加(P0.05),跨越隐匿平台的次数明显增加(P0.05),入水朝向角明显减小(P0.05);H102给药组与正常组比较无显著性差异(P0.05)。2、H102对双转基因AD小鼠脑内Aβ_(1-42)、p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、CaM、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB、ATF-1和cleaved caspase 蛋白表达的影响(1)、免疫组织化学染色结果:(1).与正常组小鼠相比,模型组小鼠海马和皮层中Aβ_(1-42)和cleaved caspase 3蛋白表达染色IOD值均明显增加(均P0.01);与模型组小鼠相比,H102给药组小鼠海马和皮层中Aβ_(1-42)和cleaved caspase 3蛋白表达染色IOD值均明显减少(均P0.01);H102给药组小鼠海马和皮层中Aβ_(1-42)和cleaved caspase 3蛋白表达染色IOD值与正常组比较均无显著性差异(均P0.05)。(2).与正常组小鼠相比,模型组小鼠海马和皮层中p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1和p-CREB蛋白表达染色IOD值均显著减少(均P0.01);与模型组小鼠相比,H102给药组小鼠海马和皮层p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1和p-CREB蛋白表达染色IOD值均明显增加(均P0.01);H102给药组小鼠海马和皮层中p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1和p-CREB蛋白表达染色IOD值与正常组比较均无显著性差异(均P0.05)。(2)、Western Blot实验结果:(1).与正常组小鼠相比,模型组小鼠脑中Aβ_(1-42)、CaM和cleaved caspase 3蛋白表达量均明显增加(P0.01);与模型组小鼠相比,H102给药组小鼠脑中Aβ_(1-42)、CaM和cleaved caspase 3蛋白表达量均明显减少(P0.01);H102给药组小鼠脑中Aβ_(1-42)、CaM和cleaved caspase 3蛋白表达量与正常组比较均无显著性差异(P0.05)。(2).与正常组小鼠相比,模型组小鼠海马和皮层中p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB和ATF-1蛋白表达量均显著减少(均P0.01);与模型组小鼠相比,H102给药组小鼠海马和皮层p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB和ATF-1蛋白表达量均明显增加(均P0.01);H102给药组小鼠海马和皮层中p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB和ATF-1蛋白表达量正常组比较均无显著性差异(均P0.05)。结论:β片层阻断肽H102能够显著地抑制双转基因AD小鼠脑内Aβ_(1-42)错误折叠和聚集;可能激活双转基因AD小鼠脑内CaMKⅡ-CREB信号通路,增加脑内p-PKCα、p-PKCβ2、p-PKCγ、p-NMDAR1、p-CaMKIIα、p-CaMKIIβ、p-CREB和ATF-1蛋白表达,抑制CaM和cleaved caspase 3蛋白表达,从而显著提高双转基因AD小鼠的学习记忆能力。
【关键词】：β片层阻断肽H102 APP/PS1双转基因 Morris水迷宫 Western Blot免疫组织化学 Aβ_(1-42) CaM-CaMKⅡ-CREB信号通路
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 缩略语12-13
• 前言13-17
• 研究现状、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、β片层阻断肽H102对双转基因AD小鼠行为学的影响17-27
• 1.1 对象和方法17-20
• 1.1.1 实验对象17-18
• 1.1.2 实验方法18-19
• 1.1.3 统计学处理19-20
• 1.2 结果20-23
• 1.2.1 定位航行实验结果20-21
• 1.2.2 空间探索实验结果21-23
• 1.3 讨论23-26
• 1.3.1 阿尔茨海默病与认知功能23-24
• 1.3.2 Morris水迷宫的原理应用24
• 1.3.3 β片层阻断肽H102对双转基因AD小鼠学习记忆能力的影响24-26
• 1.4 小结26-27
• 二、β片层阻断肽H102对双转基因AD小鼠脑内Aβ蛋白表达及CaM-CaMKⅡ-CREB信号通路的影响27-58
• 2.1 对象和方法27-41
• 2.1.1 实验对象27-32
• 2.1.2 实验方法32-41
• 2.1.3 统计学处理41
• 2.2 结果41-53
• 2.2.1 免疫组织化学检测实验结果41-46
• 2.2.2 Western Blot检测实验结果46-53
• 2.3 讨论53-57
• 2.3.1 β片层阻断肽H102对Aβ蛋白表达的影响53-55
• 2.3.2 β片层阻断肽H102对CaM-CaMKⅡ-CREB信号通路的影响55-57
• 2.4 小结57-58
• 结论58-59
• 参考文献59-66
• 发表论文和参加科研情况说明66-67
• 综述 CREB信号通路在中枢神经系统的研究进展67-77
• 综述参考文献72-77
• 致谢77-78
• 个人简历78

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本文编号：646967