PUMA在甲基苯丙胺介导小胶质细胞活化中的作用

发布时间：2017-08-12 20:36

  本文关键词：PUMA在甲基苯丙胺介导小胶质细胞活化中的作用

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【摘要】：目的：阐明PUMA在甲基苯丙胺介导小胶质细胞活化中的作用及相关分子机制,为甲基苯丙胺致神经炎性反应提供潜在的治疗靶点。方法：应用Western blot检测PUMA蛋白表达、信号通路相关蛋白及活化的小胶质细胞(M1,M2a和M2c)表型指标；应用Carboxy-H2DCFDA探针检测小胶质细胞内ROS含量；应用染色质免疫沉淀实验检测PUMA启动子区域与核转录因子STAT3之间的相互作用；利用PUMA KO小鼠,结合Western blot和免疫染色的方法,从整体水平进一步验证PUMA在甲基苯丙胺介导小胶质细胞活化中的作用。结果：1)甲基苯丙胺(150 μM)呈时间依赖性上调BV-2细胞和原代小胶质细胞PUMA表达；2)甲基苯丙胺通过作用于BV-2细胞Sigma-1受体而引起PUMA表达上调；3)ROS介导甲基苯丙胺引起的BV-2细胞PUMA表达上调；4)信号通路MAPKs和PI3K/Akt通路磷酸化及其下游核转录因子STAT3转核参与甲基苯丙胺引起的PUMA表达上调；5)甲基苯丙胺(150μM)呈时间依赖性引起小胶质细胞活化M1表型标志物(iNOS)水平升高,而M2a表型标志物(Arginase)表达水平下降,M2c表型标志物(SOCS3)未见显著变化；6)沉默PUMA表达可以显著减少甲基苯丙胺导致的小胶质细胞活化,而过表达PUMA可以加剧小胶质细胞活化；7)整体水平,腹腔注射甲基苯丙胺(30 mg/kg)引起小胶质细胞活化,但在PUMA KO小鼠上不能引起小胶质细胞的活化。结论：甲基苯丙胺引起小胶质的细胞活化是通过作用于Sigma-1受体,引起细胞内ROS生成增多,从而活化MAPKs和PI3K/Akt信号通路,进而促进核转录因子STAT3转核,最终导致PUMA蛋白表达上调并介导小胶质细胞的活化。
【关键词】：甲基苯丙胺 小胶质细胞 PUMA M1/M2
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.6
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 中英文缩略词表8-10
• 前言10-12
• 第一章 文献综述12-17
• 第二章 材料与方法17-30
• 2.1 实验材料17-23
• 2.2 实验方法23-30
• 第三章 实验结果30-38
• 3.1 Sigma-1受体介导甲基苯丙胺上调小胶质细胞PUMA表达30
• 3.2 ROS介导甲基苯丙胺上调小胶质细胞PUMA表达30-32
• 3.3 MAPKs和PI3K/Akt信号通路介导小胶质细胞PUMA表达32-33
• 3.4 STAT3介导甲基苯丙胺上调小胶质细胞PUMA表达33-34
• 3.5 PUMA介导甲基苯丙胺引起的小胶质细胞活化34-35
• 3.6 整体水平筛选甲基苯丙胺诱导小胶质细胞活化的脑区35-36
• 3.7 整体水平PUMA在甲基苯丙胺诱导小胶质细胞活化中的作用36-38
• 第四章 讨论38-42
• 结论42-43
• 参考文献43-54
• 致谢54-55
• 攻读学位期间成果55-56
• 作者简介56

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本文编号：663541